转基因成分荧光定性PCR检测要点.pptx

转基因成分实时荧光定性PCR检测实验室设计目录01PCR实验室各区域规划02各区域功能性及要求0304人员及环境注意事项转基因食品、实时荧光PCR技术转基因食品及荧光定性PCR技术01转基因食品：转基因生物是指通过转基因技术改变基因组构成的生物，转基因食品即是以转基因生物为原料制作加工而成的食品。转基因检测技术实时荧光PCR灵敏度低、易被污染、耗时长、试剂毒性大灵敏度高、抗污染能力强、耗时短、试剂毒性小传统荧光PCRPCR实验室各区域规划02实验室设计依据在由中华人民共和国卫生部办公厅于2002年1月14日下发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》卫医发[2002]10号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》要求：PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。实验室设计标本制备区扩增产物分析区扩增反应混合物配制和扩增区试剂贮存和准备区实验室平面图物品传递窗各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行实验室采用三十万级条件建设（条件允许）气压负压气压正压气压负压气压正压各区域功能性及要求03该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。该区域主要进行的操作为DNA扩增。此外，已制备的DNA模板(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。各区域功能性及要求试剂准备区配置设备· 超净工作台或试剂配置箱·试剂冰箱·可调移液器一套（四支），·配有带滤芯（防止气溶胶）及无RNase酶的吸嘴·无粉的乳胶手套·涡旋器·无菌离心管·微量加样器·天平·专用工作服标本制备区配置设备·   生物安全柜·   样本冰箱·   可调移液器一套（四支），·  带滤芯（防止气溶胶）及无RNase酶的吸嘴·  高速冷冻离心机·  台式高速离心机·  涡旋器·恒温设备·DNA提取试剂盒·  无菌离心管· 试管架· 无粉的乳胶手套·  专用工作服标本制备区设备配置(供参考）扩增区配置设备· 荧光定量PCR仪·  PCR扩增仪·  二级生物安全柜（可根据需要）·微量加样器·  专用工作服扩增区设备配置(供参考)产物分析区配置设备·孵箱· 洗板机· 酶标仪· 电脑及数据处理系统· 专用工作服产物分析区设备配置(供参考)人员、环境及其他注意事项04规范的操作（人员）（1）扩增检验实验室的技术人员必须是分子生物学专业或从事过分子生物学实验的技术人员；（2）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换，穿防护服。此外，操作中使用一次性帽子有效地防止污染；（3）扩增产物分析区会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。ABC工作区域的严格划分（1）各个实验区域设置合理；（2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等）以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。合理的系统设置（1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；（2）严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。注意事项注意事项D严格的管理（1）严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门；（2）设备使用有日常记录；（3）严格的紫外灯配置及消毒设施。感谢您的聆听