TM-085微生物限度检查法.docVIP

微生物限度检查法 起草人 审核人 审核人 批准人 部门 QC QA QC 质量管理部 姓名 饶涛 黄祥彪 汪大才 邓志军 签名 日期 分发部门： 质量管理部QC 目的 制订微生物限度检查法的标准操作规程，便于检验中使用。 范围 需进行微生物限度检查的物料。 职责 QC 操作内容 4.1 4.1.1 本规程规定了非灭菌制剂及其原辅料受到微生物污染程度的一种检查方法。包括染菌量及控制菌的检查。 4.1.2 引用标准 4.1.2.1 《中国药典》2010年版二部 4.1.2.2 中国药品检验标准操作规范》2005年版 4.2 检查一般要求 4.2.1 供试品应随机抽样，如遇有异常或可疑的样品，须选取有疑义的样品。一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。供试品在检验前不得开启，在检查前及检查中应防止供试品污染菌受损、致死或繁殖。凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出发霉、变质的药品，可直接判为不合格，无需再抽样检查。 4.2.2 检查的全部过程均应严格遵守无菌操作，严防再污染。 4.2.3 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃，控制菌培养温度为35～37℃。 4.2.4 细菌、霉菌（酵母菌）计数和控制菌检查，均应作对照试验。 4.2.5 检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告。 4.3 仪器 4.3.1 恒温培养箱（30～35℃）、生化培养箱（23～28℃）、微波炉、匀浆仪（3000 ～ 8000r/min）或康氏振荡器、恒温水浴、电热干燥箱（250～300℃）、电冰箱、离心机、HTY-2000A型集菌仪、蒸汽灭菌器（使用时要进行生物指示剂灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。菌落计数器、显微镜（1500x）、电子天平或天（感量0.1g），PH 系列比色计。 4.3.2 玻璃器皿锥形瓶，内装玻璃珠若干；、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、注射器等）、注射针头、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）、不锈钢桶（带盖）。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm 处塞入约2cm 适宜疏松的棉花，置吸管筒内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞或棉塞，若用振荡器制备混悬液时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞，以免振荡时供试液污染瓶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃.灭菌30min，烘干或160℃干热灭菌2h，备用。 4.3.3 用具大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用75%乙醇溶液浸泡）。无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。 也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。 接种环、乙醇灯、75%乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆、陶瓦盖实验记录纸等。 4.4 培养基及其制备方法：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）、胆盐乳糖培养基（BL）、曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）、麦康凯琼脂培养基（MacC）三糖铁琼脂培养基（TSI）4-甲基伞形酮葡萄苷酸培养基（MUG）等的制备方法应严格按照包装说明的方法配制。 4.5 试液 4.5.1 靛基质试液 取对二甲氨基苯甲醛5.0g，加入戊醇（或丁醇）75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入，加滴边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深；或取对二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95％乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。 4.6 稀释剂 4.6.1 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。 4.7 供试品的检验量 4.7.1 每批供试品检验量一般为10g或10ml。 4.7.2 供试品均须取自2个以上的包装单位。 4.8 供试液的制备 按供试品的理化特性与生物学特性可采取适宜的方法制成供试液。。供试液的制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃30分钟。除另有规定外，常用的供试品制备方法如下： 4.8.1 液体供试品 取供试品10ml，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为1：10供试液。 4.8.2 固体供试品 称取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其它适宜方法，混匀后，作为1:10供试液。 4.9 细菌、霉菌与酵母菌计数 4.9.1 计数方法的验证 由于某些供试品具有抗菌活性，在建立