20_S_人参皂苷h_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响.docVIP

20_S_人参皂苷Rh_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响 ±S）表示，组间分析比较采用t检验，P0.05表示差异有统计学意义。 结果 3.1 20（S）-G-Rh2对Caco-2和HT-29细胞增殖的影响 二乙酸荧光素（FDA）可透过细胞膜并脱脂释放荧光素积累在活细胞中，激发和发射波长分别为488nm和530nm，常用于检测细胞存活率。本研究采用FDA为荧光指标剂建立了微孔板法进行20（S）-G-Rh2对人结肠癌细胞Caco-2和HT-29的增殖影响研究。结果显示，20-（S）-G-Rh2对Caco-2和HT-29细胞增殖具有明显的抑制作用，其抑制作用随药物浓度而增强，呈现较好的剂量依赖性。计算药物对HT-29和Caco-2细胞的半数抑制率（IC50）分别为19.68μg/mL和25.79μg/mL。（结果如表1，图1、2）。 3.2 显微镜观察细胞形态学变化 20μg/mL 20（S）-G-Rh2处理48h后的HT-29细胞较空白对照组细胞成群贴壁生长、细胞透亮，折光性好。而给药组细胞之间互相脱离，颜色加深，贴壁细胞数量减少，细胞轮廓消失。（见图3）。 3.3 20（S）-G-Rh2对HT29细胞周期的影响 20（S）-G-Rh2处理24h后细胞，用流式细胞仪检测细胞周期各时相细胞数。结果显示;20μg/mL 20（S）-Gh2处理24h后HT-29细胞在细胞周期的分布发生娴熟性的变化。对照组G0/G1期、G2/M期、G2/M期、S期细胞比例分别为（76.78±4.0）%、（3.61±2.1）%和（19.60±3.59）%、（0.8±1.21）%及（54.54±2.17）%：给药组20（S）-G-Rh2的G0/G1期和G2/M期细胞比例明显的减少，S期细胞比例升高，与对照组有显著性差异（P0.05），具有统计学意义，（建表2，图4）。 4 讨论 结肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，临床主要以手术治疗并术后放疗和化疗为主要治疗手段，但对晚期效果不佳。人参皂苷是人参的主要生物活性成分，人参皂苷单体中G-Rh2具有抑癌活性，并对正常组织毒性甚低。目前体内外实验结果表明：通过对细胞周期的影响，诱导细胞凋亡，从而时间和剂量依赖性的抑制多种多种肿瘤细胞的增殖。但20（S）-人参皂苷Rh2对人结直肠癌细胞Caco-2和HT-29的研究还未见到报道,因此本研究通过体外培养人结肠癌细胞Caco-2和HT-29细胞，考察20（S）-G-Rh2对人结肠癌细胞的凋亡及细胞周期的影响做初步的探究。本研究结果表明，20（S）-G-Rh2可抑制人结肠癌细胞Caco-2和HT-29细胞生长，且这一变化在实验范围内存在剂量依赖性，其IC50分别为19.68和26.79μg/mL。显微镜下现实：当一定剂量的20（S）-G-Rh2作用48h后的人结肠癌细胞HT-29出现明显的细胞死亡形态。肿瘤的发生是一个多步骤、多因素、多阶段改变的过程，其中细胞周期调控失控被认为是肿瘤发生的重要机制。细胞凋亡可发生在细胞周期的各个时相。采用流式细胞分析技术进行细胞周期研究，结果显示：20（S）-G-Rh2能显著减少HT-29细胞的G0/G1期和G2/M期细胞比例，增加S期细胞比例，说明20（S）-G-Rh2可阻滞人结肠癌细胞HT-29于S期。与β-拉帕醌阻滞结肠癌细胞SW480、SE620和DLD-1于S期进而导致凋亡的机制相同。综上所述，20（S）-G-Rh2可抑制人结肠癌Caco-2和HT-29细胞增殖，其抑制作用主要是由于其可阻滞细胞处于S期，S期为DNA辅助器，大量的DNA在此期间解旋复制，暴露活性位点，为化疗药物提供更多的靶点。20（S）-G-Rh2可阻滞结肠癌细胞于S期导致凋亡，可与阻滞细胞于G0/G1或G2/M期的化疗药物联合治疗结肠癌。但其确切的分子机制将有待于进一步探讨，20（S）-人参皂苷-Rh2单体将在临床防止肿瘤方面具有广泛的应用前景。