BIO-RAD电穿孔要点.docxVIP

/html/201312/6824083.html制备的电转化的感受态细胞可以用于化学转化操作吗？举报删除此信息ljy525380?(站内联系TA)一般来说，电转感受态制备时都要用水和10%甘油洗数遍，其目的是为了尽可能的去除其中的盐离子成分，电击时才可以使电压附加在细胞两极，从而形成电穿孔，而不是电子直接通过盐离子传递；而热激感受态则是通过Ca2+等离子和试剂的作用改变细胞膜两侧渗透压，造成低渗的环境，菌会变得膨胀，细胞膜变薄，从而热激时吸收附着在菌表面的DNA。所以我感觉电转感受态是不太可能用于热激的，这些都是我认为的，供你参考吧cicelyzh?(站内联系TA)不能。两种感受态的原理不同，LS的正解。电转化感受态细胞的制备主要是脱盐。略Gene PulserXcell? 系统是用于转染每种细胞类型的模块化电穿孔系统。系统包括主单元、ShockPod? 电击槽以及选择的附件模块：电容扩增器（CE 模块）和脉冲控制器（PC 模块）。功能和优点通用电穿孔 — 转染所有细胞类型（从原代细胞和干细胞到细菌和酵母菌）预设实验方案?— 包括最常见的哺乳动物和细菌细胞类型灵活性 — 预设实验方案、优化实验方案、手动操作和/或用户实验方案的程序选择实验方案库?— 一系列电穿孔实验方案，适用于包括原代细胞、永生细胞和细菌细胞在内的各种细胞类型数据管理 — 能够存储和调用前 100 次试验中使用的参数，有助于故障排除可重复性 — 使用PulseTrac? 电路和电弧保护功能以确保可重复性和样品防护系统选项Gene PulserXcell总电穿孔系统（货号 165-2660）— 用于转染真核细胞和原核细胞的完整电穿孔系统；包含 CE 模块和 PC 模块Gene PulserXcell真核电穿孔系统（货号 165-2661）— 用于大多数真核细胞（包括哺乳动物细胞和植物原生质体）的电穿孔；包含 CE 模块Gene PulserXcell微生物电穿孔系统（货号 165-2662）— 用于细菌和真菌的电穿孔，以及对小体积样本施加高压脉冲的其他应用；包含 PC 模块更多信息功能可修改的传送参数包括时间常数、施加的实际电压、脉冲间隔和脉冲时间，具体取决于选择的波型（指数波或方波）提供一系列用于手动操作、预设实验方案、用户实验方案和优化实验方案的相关程序与 0.1 cm、0.2 cm 和 0.4 cm Gene Pulser?/Micropulser? 电穿孔比色皿兼容与任何电穿孔缓冲液都兼容，包括 Bio-Rad 的 Gene Pulser电穿孔缓冲液电转化仪仪器型号：GenePulser II生产商： USA Bio-Rad工作原理：Gene PulserⅡ电转化仪器可用于原核细胞、酵母和哺乳动物细胞的转化。仪器采用Pulse Trac波形传送系统，能产生最精确的指数衰减的脉冲，可在电转化杯里获得最佳的细胞转化。电穿孔是一个物理过程，利用电脉冲瞬时穿透原核细胞或真核细胞的细胞膜，使得细胞能够吸收各种不同种类的生物分子。当用化学或其他物理方法转化某些类型的细胞效率不高或有毒性时，电转化则可能是一种有用的方法。Gene PulserⅡ电穿孔仪由三个部分组成：Gene PulserⅡ装置及两个附属设备Pulse Controller PLUS和Capacitance Extender PLUS。Gene PulserⅡ可与另两个附属设备中的任意一个一起使用：对于细菌和酵母细胞的电转化（高电压/低电容），使用Pulse Controller PLUS；对于哺乳动物细胞和胚胎组织的电转化（低电压/高电容），则应使用Capacitance Extender PLUS。系统参数：输入电压 220-240V，50-60HZ输入电流15A最大输出电压和电流2500V，125A（正常负荷）电弧时限定值1500A输出波形 Pulse Trac指数衰减，RC时间常数取决于所选的样品和电容器输出电压调节 50-2500V范围（取决于电容器）内，低电压范围（50-500V）和高电压范围分别具有2V和10V的调节精度。工作环境温度 0-35oC湿度 0-95%，无冷凝简易操作指南：1：打开电源2：根据自己的情况设置参数：如电容 c=25F, 电压 v=1.8kV (0.1cm 电击杯)，R=2003:将电击杯两壁水檫干4：电转：所产生的时间常数一般为4.6—5.0ms5:立即加入培养液恢复培养注意：电击杯两壁水一定要檫干；所制备的感受态细胞一定要干净，否则电流过大重点：1．电转化感受态细胞的制备第一天：?0. 高温灭菌大的离心管（25-50ml）以备第二天用?0. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升）,保存于冷冻室中以备第二天重悬浮?细胞?用?1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10