RAPD分子标记技术要点.ppt

* 生科1201班 第二小组 内容目录 RAPD基本概述 RAPD相关原理 RAPD主要特点 RAPD在中药材鉴定中的应用 RAPD在其他方面的应用 RAPD概述 RAPD，即随机扩增多态性DNA技术，是由美国科学家Wiliams和Welsh于1990年分别研究提出的，又称任意引物PCR。 RAPD是建立在PCR 基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。 RAPD相关原理 随机扩增多态性DNA（Random AmplifiedPolymorphic DNA)，是以PCR为基础，以随机的短核苷酸序列为引物，以实验材料基因组DNA为模板，进行PCR反应，找出扩增片段的多态性。由于整个基因组存在众多反向重复序列，因此需单对每一随机引物进行PCR，如果引物结合部位的核苷酸序列发生了变化，或者扩增范围内碱基出现插入或缺失，DNA重排，就会导致原来结合位点的消失或产生新的结合位点，或者使扩增片段的长度发生改变，经琼脂糖凝胶电泳分离后通过EB染色就检测出基因组所发生的变化。 RAPD主要特点 RAPD 技术目前运用相当广泛， 几乎渗透于整个基因组研究的各个方面， 这与它所具有的众多优势是分不开的。 ① 无需专门设计RAPD 扩增反应引物，也无须预先知道被研究生物基因组的核苷酸序列，引物可随机合成和随机选定，长度一般为9- 10 个核苷酸； ② 每个RAPD 反应中，仅加单个引物，就可通过引物和模板DNA 随机配对实现扩增，扩增无特异性； ③ 退火温度低，一般为36℃，这样的温度能保证核苷酸引物与模板的稳定结合，同时允许适当的错误配对，以扩大引物在基因组DNA中配对的随机性，使RAPD 有较高的检出率； ④ RAPD 技术简便易行、省时省力，不需要RFLP 分析的预备性工作：如克隆的制备、同位素标记、Southern 印记反应及分子杂交。RAPD 易于程序化，利用一套随机引物可得到大量的分子标记，并可借助于计算机系统进行分析； ⑤ RAPD 分析所需的DNA 样品量极少，这对于生物早期取样鉴定或在DNA 受限制的情况下是十分有利的。 RAPD在中药材鉴定中的应用 药材原植物遗传多样性的研究 药材原植物品种鉴别的研究 中药材真伪鉴别的研究 中药材野生和栽培品种的研究 种质资源和道地药材研究中的应用 中成药鉴别中的应用 药材原植物遗传多样性的研究 RAPD技术通过比较物种间DNA分子遗传多样性的差异来对不同物种进行鉴别，探讨物种的亲缘关系和进化趋势。张春平等研究人员采用RAPD技术对7个野生金荞麦居群（共87个个体）进行遗传多样性分析，结果表明：金荞种内具有较高的遗传多样性，遗传变异主要存在于居群内部，这种遗传多样性与地理关系表现出明显的相关性。周红涛等研究人员通过研究发现，野生芍药与药用栽培芍药群体间的遗传距离最远，差异显著。 野生金荞麦 芍药 药用型 野生型 药材原植物品种鉴别的研究 中药材具有一药多源的特点，易于混杂，加之存在同种异名、同名异种等现象，给药材原植物品种的鉴别工作带来不小的困难。而RAPD技术在此方面有较大的优势，例如，利用RAPD技术的3种引物(S-76,S-69,S-64)标记龙胆、三花龙胆、条叶龙胆，就能把3种龙胆区分开来。 龙胆 三花龙胆 条叶龙胆 中药材真伪鉴别的研究 RAPD分子标记技术可以对外观、性状相似且显微组织特征性不强、化学成分复杂、用传统形态的标记方法无法准确鉴定的品种进行鉴定，应用RAPD分子标记技术将阳春砂与海南砂、绿壳砂、缩砂等常见的姜科近缘伪充品相鉴别，结果表明，它们之间呈现明显的指纹差异，而不同产地阳春砂的RAPD指纹则基本一致。 阳春砂 海南砂 绿壳砂 缩砂 中药材野生和栽培品种的研究 由于中药材的生长环境的不同，野生种和栽培种之间会有不同程度的差异。因此，中药栽培对药材的品质有着巨大的影响。RAPD技术在此方面也有较大的应用前景。于超等研究人员通过大量的研究发现，当虫草的菌种相同，虫体一致，且生长环境相近似时，天然冬虫夏草与人工冬虫夏草指纹图谱的相似率较高，两者的分子基础也有较大的相似之处，由此可见，虫部的DNA差异是造成其相似率差异的主要原因。 冬虫夏草又名虫草，是我国民间惯用的一种名贵滋补药材，其营养成分高于人参，可入药，也可食用，是上乘的佳肴，具有很高的营养价值。冬虫夏草可以增强机体的免疫力，滋补肺肾，对肺癌、肝癌等有明显的抑制作用。在临床上对肺虚久咳，气喘，肺结核咯血，盗汗，肾虚腰膝酸痛，神经衰弱及化疗、放疗后的红细胞下降等疾病都有疗效。 天然冬虫夏草 人工冬虫夏草 种质资源和道地药材研究中的应用 道地药材是建立在优良种质资源的基础之上。因此，