学生细胞生物学课题项目申请书--丹参治疗心血管研究.docVIP

　　　　　　　　　　　　 xxxxxx 大学 xxxx 学院 学生细胞生物学课题项目申请书 项目名称： 项目技术负责人： 项目申请单位： 学院： 班级： 姓名： 学号： 一、立项的背景和意义 心血管流行病学调查显示，尽管近30年来心血管病死亡率除东欧各国外的大多数国家都有不同程度的下降，但其仍是多数国家45岁以上男性第一位的死亡原因，在女性则是仅次于肿瘤的第二位死因，严重影响着人类的期望寿命和生存质量（资料来源：《世界卫生组织卫生统计年报》，1993日内瓦）。我国已进入老龄化社会，是世界上老年人口最多的国家，预计到本世纪中叶，老年人口将达到4亿。同时随着人们生活水平的不断提高、膳食不当、生活习惯和外部环境等多种因素，近年来心血管疾病已成为我国发病率和死亡率高居第一的疾病，严重影响着人们的生命健康，其发病及防治受到全社会的极大关注。 二、国内外研究现状和发展趋势 近年来，分子生物学和细胞生物学的研究成果促使心血管药理学内容日新月异地更新，对心血管病症的研究相对成熟，大部分心血管相关基因研究比较清楚，药物的作用靶点也相对明确而我国传统中药丹参及其复方在治疗冠心病、动脉粥样硬化方面以其疗效确切、副作用小、安全、经济等优点，成为临床最常用的治疗血瘀症冠心病中药。丹参为唇形科多年生草本植物丹参（Salvia miltiorrhiza）的根茎，始载于《神农本草经》。丹参的化学成分目前已研究得较为系统，主要为共轭醌、酮类化合物，酚酸类物质，具有较广泛的药理的作用，其中对循环系统的影响研究得较多，大量的药理学研究表明，丹参具有抗心肌缺血、舒张血管、保护内皮损伤、缩小心肌梗塞面积，抗自由基、减少缺血再灌注心肌损伤，保护心肌高能磷酸化合物等广泛的心血管活性。药代动力学研究结果表明，丹参素和儿茶醛可经肌肉和胃肠道吸收入血，隐丹参酮口服吸收较差或吸收后迅速被肝脏转化, 一部分首先转化为丹参酮ⅡA, 后者进一步被羟化代谢为含羟基代谢物, 并结合内源物使极性增大而利于排出。分子药理学的研究表明复方丹参可通过影响基因的表达调控达到治疗作用，如丹参可抑制血管内皮细胞和粒细胞表达CD11b、ICAM-1、E-selectin等粘附分子，抑制血管平滑肌细胞表面CD54等粘附分子表达，降低血小板膜粘附分子CD41、CD62P、和P-选择素的表达，丹参酮可以抑制心肌细胞c-jun基因的表达等。国际上对其保护心血管作用的研究亦逐渐增多；日本学者研究表明，丹参提取物可抑制血小板聚集；台湾学者近期研究表明丹参提取物对TNF-α所致主动脉内皮细胞粘附分子表达的抑制作用呈剂量依赖关系。但丹参保护心血管作用的药理研究仍不够深入，尤其是其作用途径、靶标不甚明晰。王升启教授领导的研究组对复方丹参方保护心血管作用的分子机理以及四物汤化学成分组合补血作用及其机理研究进行了一定的探索，并据此提出“化学基因组学”理论，认为中药复方是通过化学成分组合影响到信号分子组合，使紊乱的信号分子网络恢复平衡，从而达到治疗中医的证和相关疾病的作用和效果。本项研究旨在探索中药丹参保护心血管作用的分子机理，通过化学组学、基因组学及蛋白质组学技术发现其作用的“组合靶标”，在“化学基因组学”研究技术平台层面上进行成分-靶标相互作用研究，进而验证丹参保护心血管作用的靶标以及找到疗效确切、安全经济的单体及其组合，为高技术含量的中药研发、产业现代化和国际化提供一些基础数据。 三、项目主要研究开发内容和技术关键 1.主要研究开发内容 1.1 基于表达谱的生物信息学药靶发现 利用靶标相关基因芯片、蛋白质组学和基于表达谱的生物信息学药靶发现技术，从血淤证模型中发现候选靶标。 1.2 基于化学基因组学的成分-靶标相互作用研究 采用实时荧光RT-PCR、WESTERN印迹等技术，在血瘀证模型（血管内皮、平滑肌、心肌及血小板）上观察有效单体及组合对各作用靶标及其通路和网络的调控作用，初步确定各有效成分作用的靶分子及特异性； 然后采用生物质谱及亲和色谱等技术，在分子水平上分析有效成分与靶分子的结合性能，从而验证成分和靶标的可药性； 最后在动物体内验证有效成分（组合）对靶标（组合）作用的有效性。通过基因芯片及蛋白质组技术实验初筛获得8-15个潜在靶标，并进一步通过生物信息学筛选4-5个候选靶标，结合反义及siRNA技术，对候选靶标进行特异性验证，获得1-2个丹参有效成分的作用靶标。 针对上述靶标，研究丹参有效成分及其组合（配伍）对其表达和调控的影响，获得