单克隆抗体与动物细胞融合要点.ppt

为什么灭活的病毒能作诱导剂？ 灭活丧失感染性 保留融合活性 鼠B淋巴细胞 鼠骨髓瘤细胞 人工诱导 杂交瘤细胞 动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。 问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？ 2.1单克隆抗体的概念 一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激B淋巴细胞，使其分裂分化出特异性的效应B细胞，分泌特异性抗体。 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 2.1单克隆抗体的概念 单: 单个细胞 克隆: 无性繁殖 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体 提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 问题：如何大量生产单克隆抗体？ 2.2单克隆抗体的制备 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞 实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理： 实验过程： 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验 2.2单克隆抗体的制备 看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 描述单克隆抗体制备过程步骤 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基 筛选1 专一抗体检测 克隆化 单克隆抗体 有限稀释法培养 筛选2 1.注射抗原的目的是什么？ 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基 筛选1 专一抗体检测 克隆化 单克隆抗体 有限稀释法培养 筛选2 2.诱导细胞融合的手段有哪些？ 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基 筛选1 专一抗体检测 克隆化 单克隆抗体 有限稀释法培养 筛选2 3.若细胞两两融合后，有几种融合情况？ 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基 筛选1 专一抗体检测 克隆化 单克隆抗体 有限稀释法培养 筛选2 4.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？ 5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？ 有限稀释法 稀释多次 稀释 将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法 有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。 问题：单克隆抗体的突出优点是什么？ 特异性强、灵敏度高 克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 2.3单克隆抗体的应用 诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 运载药物 (“生物导弹” —单抗导向，药物为弹头) 治疗疾病 1、检验医学诊断试剂 目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于： ①病原微生物抗原、抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞及其亚群的的检测；④激素测定；⑤细胞因子的测定。 2、蛋白质的提纯 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或PH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。 3、肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术 将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利用单克隆抗体的导向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗。另外，将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。目前单克隆抗体主要为鼠源性抗体，异种动物血清可引起人体过敏反应。因此，制备人-人单克隆抗体或人源化抗体更为重要，但此方面仍未取得明显进展。 课后作业 通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集资料，了解细胞融合技术与单克隆抗体的新进展，就自己感兴趣的领域，自定选题，写一篇综述报告。 参考选题： 1、1984年诺贝尔生理学或医学奖 2、单克隆抗体的种类； 3、单克隆抗体与疾病诊断； 4