郭莉娜-细菌染色技术要点.pptVIP

细 菌 染 色 技 术 细菌染色方法 细胞不染色而背景染色 燃料与细胞结合而染色 常用的染色方法 革兰染色：最经典常用；革兰阳性、阴性菌；初步识别特殊形态 抗酸染色：抗酸性、非抗酸性细菌；用于结核病、麻风病等 荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；用于结核分枝杆菌等 其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量； 异染颗粒染色白喉棒状杆菌； 荚膜染色 常用燃料 碱性染料 带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。 酸性染料:显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。 通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、刚果红等。 复合染料（中性染料）：是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料(伊红天青)等； 荧光染料：如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。用于某些特殊的染色技术。 脂溶性染料 如Sudan black。 染色方法的分类 1.单染法:采用一种染料染色 2.复染法（鉴别染色）: 采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。 染色过程 涂片 干燥 固定 染色 水洗、吸干 镜检 细菌基本形态结构 基本形态 球菌 杆菌 弧菌 特殊结构 芽孢：枯草杆菌、破伤风梭菌 荚膜：肺炎链球菌 鞭毛：变形杆菌 标本处理 痰液：用无菌棉签挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml，涂于载物玻片右2/3 处，均匀涂抹成卵圆形痰膜（约2cm长),每张玻片只涂一份标本。 脓液： 同痰涂片法。 病灶组织或干酪块等：先用组织研磨器磨碎后再行涂片。大小、厚度同痰涂片。 体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉渣涂片。大小、厚度同痰涂片。 脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。 大便：取粘液便或者血便少量均匀涂布玻片，不可过厚。 标本处理注意事项 标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避免标本涂布不均影响结果判读，或使染色不均造成阴阳不定。 标本涂布不能过厚，影响染色效果。 体液标本应浓缩集菌后取沉渣涂片。 革兰染色法（Gram Stain） 一、原理 细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。 二、步骤 标本处理 三、结果: 阳性菌——紫色 阴性菌——红色 四、影响因素 1.操作： 涂片的厚薄，不宜过厚 染色时间的把握，尤其是脱色时间，脱色不宜过度 固定过程不可用酒精灯直接加热，避免过热使菌体变性而影响染色效果。 2.染液 染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果 3.细菌因素 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会影响染色结果，如培养时间过长革兰阳性菌可能染成阴性，所以被检菌的菌龄一般最好在18~24h之内。 某些细菌存在染色困难、不易脱色等情况，可能会出现染色不均，阴阳不定的现象。 五、临床意义 鉴别细菌： 用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌，以利进一步鉴定。 选择药物： 可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。 与致病性相关： 大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。 抗酸染色法 一、原理 结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色），也就易于鉴别。 涂片固定 酸性复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检 标本处理 二、步骤 三、结果: 抗酸菌———红色； 非抗酸菌——蓝色。 抗酸染色注意事项 每张玻片只能涂一个标本，以免染色过程中因冲洗使菌体脱落，造成阴阳性结果混淆； 注意生物安全，自我防护； 脱色时间依据涂片厚薄适当调整，以无红色为止。 荧光染色法 一、原理 抗酸杆菌用荧光燃料Auramine O(金胺O)染色后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，将会发出闪