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动物细胞计数及存活率的测定 一、【实验目的】 1、掌握染料排除法鉴定细胞死活的原理。 2、学习用血球计数板进行细胞计数测定细胞的存活率的方法。 在显微镜下从形态上很难区分死、活细胞。但是，死细胞可被某些染料如台盼蓝、伊红和苯胺黑等染上相应的颜色，而活细胞则不会被染色。因此，可根据细胞是否被染料着色来区分细胞的死活。 血球计数板 血球计数板是一块上面刻有“H”型凹槽的特制的厚玻璃板。H型凹槽在玻璃板中间围成上下两个平台，而且中间这两个平台比两侧平台要低0.1 mm 血球计数板的计数室 每一大方格面积为 1 mm×1 mm，由于有0.1mm的凹度空隙，因此盖上盖玻片后容积为0.1 mm3，（0.1ul） 三、【实验仪器与试剂】 仪器与器材：显微镜、血球计数板、吸管、培养皿、试管、软布或擦镜子 试剂：0.4%台酚蓝染液，生理盐水，酒精 四、【实验步骤】 细胞死活的鉴定及计数 1、用95%酒精冲洗血球计数板及盖玻片，用电吹风吹干。把盖玻片覆在计数板上面，露出计数板台面少许，以便滴加细胞悬液。 2、取吸管一支，伸入培养瓶中，吸取细胞悬液向一小试管中滴入6滴，再滴入0.4%台盼蓝3滴，混匀，染色2-3分钟。如果细胞悬液含细胞过多，可先用MEM培养液稀释，稀释倍数视情况而定，然后再进行染色。 3、向计数板边缘处轻轻滴加1-2滴已染色的细胞悬液，使之充满计数板和盖玻片间的空隙。 4、显微镜下观察