目的基因的连接转化涂板培养-liu要点.pptVIP

α-互补 标志补救（?-半乳糖苷酶法） lacZ Am N2H ?片段 COOH ?片段 lacZ （LacZ基因 N端序列） 插入片段 （LacZ基因失活） LacZ基因 C端序列 LacZ酶 X-gal Lac Z 蓝色化合物 α-互补蓝白筛选 lacZ β-半乳糖苷酶 分解乳糖 i P O 调控蛋白P 大肠杆菌的β-半乳糖苷酶基因lacZ系统 a-互补显色反应（蓝白斑筛选） lacZ - β-半乳糖苷酶- 分解乳糖 i P O 调控蛋白P α-肽段 分解X-gal 产物呈现蓝色 诱导剂IPTG β-半乳糖苷酶基因lacZ突变体M15 重组DNA技术操作过程可形象归纳为 分 分离目的基因 切 限制酶切割目的基因与载体 接 连接重组体 转 转入受体细胞 筛 筛选重组体、转化子 重组DNA技术操作的主要步骤 载体 质粒 噬菌体 病毒 目的基因（外源基因） 基因组DNA cDNA 人工合成 PCR产物 限制酶消化 开环载体DNA 目的基因 连接酶 重组体 转化 体外包装，转染 带重组体的宿主 筛选 表型筛选 酶切电泳鉴定 菌落原位杂交 * 氯化钌（liao） * 倒置培养原因：温育的时候，培养基的水分要蒸发，形成水珠，如果正放的话水珠集聚在培养基平面上会影响菌落的生长，所以要保证培养基的干燥，就得倒置培养. 这是一点,还有就是便于拿取,大下小上,不会打掉.也防止外物掉在