王玮生物化学第12章浅析.ppt

第十二章 核 酸 的 生 物 合 成 本章内容 DNA的生物合成 RNA的生物合成 概念: 复制(replication)： 指以亲代DNA分子 为模板合成出子代 DNA分子的过程。 转录(transcription)： 以DNA分子为模板合 成出与其核苷酸顺序 相对应的RNA的过程。 反转录(reverse transcription)： 以RNA为模板将遗传信息传给DNA的过程。 一、DNA的生物合成 （一）DNA的半保留复制 1、半保留复制假说的提出： 1953年，Watson Crick在DNA双螺旋基础上提出。 DNA复制的假设： 有3种可能： 1）全保留式； 2）半保留式； 3）混合式。 2、实验证明： 方法： 将E.Coli培养在以15NH4Cl为唯一氮源的培养基中生长；提取其DNA ；进行氯化铯密度梯度离心。 再移至14N培养基中生长、提取DNA、离心分析。 结果： 证实了DNA复制时，亲代分子分为二个亚单位（两条链），分别构成子代分子的一半，且经过多代仍保持完整性。 3、意义： 1）半保留复制保证了遗传的稳定性； 2）DNA是处于不断变异和发展之中。 （二）DNA复制的起点和方向 实验：用3H标记的dT 得到含3H的DNA； 放射自显影。 推测：若放射性在两端—双向； 若在一端—单向； 实验证明： 细菌染色体DNA是双向复制，大多是一个起点。 1、复制起点： 原核生物： 1个起点; 真核生物： 多起点； 2、方向： 多为双向 3、复制叉： 细菌为环状DNA复 制起始于单个位点， 双向，半保留，每 个复制泡（眼）包 括2个复制叉。 方向：5’→3’ 大肠杆菌E.Coli Oric起点： 有固定起点； 特殊蛋白识别起点； 起点为100-200bp的区域; 以复制叉形式完成复制。 （三）原核细胞DNA的复制（DNA指导的DNA合成） 1、大肠杆菌的DNA聚合酶 (DNApolymerase,DNApol)： 催化形成新的磷酸二酯键； 有外切酶活性。 1) E.COLi DNA聚合酶Ⅰ 需要原料： 4种dNTP； DNA模板； 与模板互补的一段RNA引物； Mg2+； Zn 2+ （酶活性部位）； DNA聚合酶Ⅰ功能： 催化dNTP加到DNA链的3’-OH末端 （方向5’ →3’） 。 5’ →3’外切酶活性，可切除引物； 3’ → 5’外切酶活性，可纠错； 2) DNA聚合酶Ⅱ: 反应需Mg2+ 、NH4 + ； 以带缺口的ds DNA为模板，反应同酶1； 具3’ → 5’外切酶活性； 3) DNA聚合酶 Ⅲ： 主要负责DNA链延伸； 具3’ → 5’外切酶活性； E.COLi的DNA聚合酶 功 能 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 5’→3’聚合作用 + + + 5’→3’外切酶作用 + － － 3’→5’外切酶作用　　+ + + 聚合核苷酸数 /min 600 30 9000 分子数/细胞 400 100 10 *DNApolⅢ主要负责DNA链延伸。 2、双链DNA复制的分子机制 （DNA半不连续复制）： 1）冈崎片段和半不连续复制 ①问题的提出： 已知DNA两条链反向且都能作为模板； 已知DNApol聚合方向5’→3’； 冈崎等提出DNA的不连续复制模型，认为： 3’ → 5’走向的DNA是由许多5’→3’方向合成的DNA片段连接而成的。 ②实验： 放射自显影； 电子显微镜 观察。 冈崎片段： 以 5’ → 3 ’走向DNA为模板合成的小片段。 约1000-2000bp。 ③结论： DNA是半不连续合成的。 前导链（leading strand): 以3’→5’ 链为模板，新生链以5’→3’方向连续合成； 后随链(lagging strand): 冈崎片段:以5’→3’链为模板链，DNApol以5’→3’方向合成小片段DNA即。 由冈崎片段连接成的DNA链为后随链。 2）RNA引物 ①问题提出： 已知DNApol只能在3’-OH上延伸， 什么提供了3’-OH？ ②实验证明：DNA合成实