第2章均相酶反应动力学.pptVIP

2-3试根据下列实验数据确定rmax、Km和KI值，并说明该酶反应是属于竞争性抑制还是属于非竞争性抑制。 2-4 某一酶反应Km值为4.7×10-5mol/L，rmax=22μmol/(L· min)，CS=2 ×10-4mol/L ，CI= 5×10-4mol /L，KI= 5 × 10-4mol /L。试分析计算在竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制三种情况下的反应速率和抑制程度。 1.定义：抑制剂与底物竞争与酶的活性部位结合，当抑制剂与酶的活性部位结合之后，底物就不能再与酶结合，从而降低了酶与底物结合的机会，使酶催化底物的反应速率下降，称竞争性抑制作用，该物质称竞争性抑制剂。 ２.2.１ 竞争性抑制动力学 2.机理： E+S [ES] E+P E+I [EI] 式中I为抑制剂 　　　　　　　　　　　　[EI]—非活性复合物 k+1 k-1 k+2 k+3 k-3 3. 推导动力学：rSI=k+2C[ES]　　 机理：E+S [ES] E+P E+I [EI] k-1 k+1 k+2 k+3 k-3 根据拟稳态假设，得： dC[ES]/dt=k+1CECS-(k-1+k+2)C[ES]=0 dC[EI]/dt=k+3CECI-k-3C[EI]=0 kI=k-3/k+3 又∵CE0=CE+C[ES]+C[EI] 式中CI—抑制剂浓度，C[EI]—非活性复合物浓度 经整理得： 式中 rSI—有抑制时的反应速率，mol/(L*s) ；KmI—有竞争性抑制时的米氏常数，mol/L； KI—抑制剂解离常数，mol/L. 将（1-2）式代入（1-1）式得： （1-1） （1-2） 4.动力学特点： 有竞争性抑制剂存在时，Km值增大(1+CI/KI)倍，且Km值随CI的增高而增大； 最大反应速度不变。 CS rSI rmax/2 km kmI 无 I 有 I(竞争性抑制) 竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 1.定义：I不与S竞争与E结合，I与E结合后，S也可与E结合，只是生成的[ESI]三元复合物不反应，而使rSI↓，为非竞争性抑制。 2.2.2 非竞争性抑制动力学 2.机理： 3.推导动力学 令：Km=k-1/k+1=CECS/C[ES] k+5C[EI]CS=k-5C[SEI] k+1CECS=k-1C[ES] 令：KI=k-3/k+3=CECI/C[EI]=C[ES]CI/C[SEI]=k-4/k+4 令：Km=C[EI]CS/C[SEI]=k-5/k+5 CE0=CE+C[ES]+C[EI]+C[SEI] k+3CECI=k-3C[EI] k+4C[ES]CI=k-4C[SEI] 整理得： 而 利用平衡态假设 式中rI,max—存在非竞争性抑制时最大反应速率。 4.动力学特点： 有非竞争性抑制剂存在时，rmax值减小（1+CI/KI)倍，且rmax值随CI的增高而降低； Km值不变。 CS rS 无 I rmax /2 km 有 I 非竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 1.定义：抑制剂不能直接与游离酶相结合，而只能与复合物[ES]相结合生成[SEI]复合物。生成的[ESI]三元复合物不反应，而使rSI↓，为反竞争性抑制。 2.2.3 反竞争性抑制动力学 K+1 K-1 K+2 K+3 K-3 2.机理：E+S [ES] E+P [ES]+I [ESI] 3.动力学推导：rSI=k+2C[ES] 平衡态假设　Km=k-1/k+1=CECS/C[ES] 得： 且KI=k-3/k+3=C[ES]CI/C[ESI]　另：CE0=CE+C[ES]+C[ESI] or 有反竞争性抑制剂存在时，Km和rmax值均减小（1+CI/KI）倍，且都随CI的增高而降低。 CS rS km kmI 4.动力学特点： 反竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 对竞争性抑制，非竞争性抑制和反竞争性抑制的抑制动力学特点进行比较． Km/(1+CI/KI)↓ rmax/(1+CI/KI)↓ 反竞争性抑制 Km不变 rmax/(1+CI/KI)↓ 非竞争性抑制 Km(1+CI/KI）↑ rmax不变 竞争性抑制 米氏常数 最大反应速率 抑制形式 表 有抑制时酶催化反应动力学参数 2.2.4 各种抑制的比较 为了表示抑制剂对酶催化反应的抑制程度，引出抑制百分数（i）．其定义式为： 式中：rS—无抑制时酶催化反应速率，mol/(L*s) rSI—有抑制