16thweek药学实验四药物的体外抗菌试验课程.pptVIP

实验四 药物的体外抗菌试验 概述 药敏试验——纸片法 药物MIC和MBC的测定 细菌总数和霉菌总数测定 一 概述 1.1 抗生素对细菌生长抑制的原理： 抑制细胞壁形成。菌体因内部物质合成持续不断而膨大，而细胞壁不能膨大，故菌体胀破，如青霉素。 破坏细胞膜。如多粘菌素 。 与微生物核糖体蛋白结合，抑制其蛋白质合成。如氯霉素，金霉素，土霉素，四环素，链霉素，卡那霉素，新霉素，庆大霉素，嘌呤霉素及春日霉素等。 与DNA结合，干扰其复制。如争光霉素(博来霉素)，丝裂霉素(自力霉素)，放线菌素D(更生霉素) 等。 四环素链霉素的杀菌机制 1.2 四环素链霉素的杀菌机制 1.3 药物体外抗菌实验方法 琼脂扩散法 连续稀释法 纸片法 管碟法 挖沟法 打孔法 二 琼脂扩散法 琼脂扩散法：将待测药物稀释后，加入含试验菌的平板中，利用药物在琼脂培养基中的扩散作用，观察药物周围的试验菌生长状况，定性或初步判断其抗菌能力。 测定抑菌圈或抑菌带的大小，评价抗菌作用强弱。 2.1 纸片法 材料与方法 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 培养基：Muller-Hinton肉汤琼脂平板 抗生素纸片：青霉素、链霉素、庆大霉素、先锋霉素 细菌培养； 置一滴菌液于琼脂平板上，无菌涂布棒（L棒）涂匀； 镊取滤纸片各一，贴于培养基相应位，稍压使紧。 皿底向上，置37℃/18~24h培养，测抑菌环直径，判定。 抑菌环 含药纸片 菌苔 1、 无菌操作，镊子和L棒使用前需火焰灭菌后冷却；镊子需火焰灭菌后再取另一药纸片。 2 、药纸片需一次贴定，不能移动。 即药纸片周围无细菌生长区。 抑菌环直径: 无抑菌环，不敏感； 6~10mm， 耐药； 10~15mm， 中度敏感； 15mm，敏感；， 2.2 管碟法 细菌培养与涂布，同纸片法。 用无菌镊子取无菌牛津杯4个，在同一块已制好的含菌平板的4个区上直立放好，牛津杯与小钢管紧密接触。每管中滴满待测的药物。 盖好，37℃/18~24h培养。观察牛津杯周围出现的抑菌圈的大小，确定杀菌力或抑菌力的大小。 2.3 打孔法 黄连 黄芩 黄柏 银花 在含菌平板上打孔，孔内加入药液，经培养后可产生抑菌圈。适用于药物血浓度监测。 2.4 挖沟法 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 痢疾杆菌 沟槽 （黄连） 制备琼脂平板，在平板上挖沟，沟旁边垂直划线接种试验菌，在沟中加药，根据沟两边的试验菌离沟的抑菌距离来判定药物的抗菌作用。适用于半流动药物或中药浸煮液的抗菌试验。 三 连续稀释法 在一系列试管中，用液体培养基按一定倍数稀释药物；在每一管中加入定量试验菌，经培养后，肉眼观察试管混浊情况，记录。 最小抑菌浓度（MIC）：能抑制测试菌生长的最低药物浓度即为MIC。 最小杀菌浓度（MBC）：能杀灭测试菌的最低药物浓度即为MBC。 供试品(1:10) 10-2 10-3 细菌总数 1 ml 霉菌总数 37℃ 每4个同学1组，每个稀释度2个重复（即2块黄色培养基，2块红色培养基）2个稀释度共8块平板，要求菌落计数。 四. 细菌总数及霉菌总数测定 倾注平板 菌落计数：将平皿底部过圆心划成四等份，肉眼观察菌落并计数，并用5~10倍放大镜查漏，求出同一稀释度的平均菌落数 菌落总数报告：选取平均菌落数在30~300间的皿 ①当只有一个稀释度的平皿菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数。 ②若有两个稀释度，其平均菌落数均在30~300之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定，若其比值≤2，应报告其平均数，若＞2则报告其中较少的菌落数 ③若所有稀释度的平均菌落数均 ＞300，即稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数 ＜30，即稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数 30~300以外，其中一个＞300，而相邻的另一＜30时，即以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数 均无菌生长，报告数为每克或每毫升少于10个。 菌落计数报告： 菌落数100以内时，按实测数值报告； 菌落数＞100时，采用二位有效数字（后面的数值四舍五入，数字后面的太多的零，用10的指数表示）。 * 这些 * 这些