动物源食品中大环内类抗生素残留检测—科标检测.doc

动物源食品中大环内酯类抗生素残留 ——科标检测 检测方法：微生物抑制法，适用于肉类、水产品、动物内脏、鸡蛋和牛奶中大环内酯类兽药筛选检测，阳性结果应用其他法进行确证。 青岛科标检测为您提供抗生素残留检测，以下介绍的是标准SN / T 1777.3-2008的方法。 1、试样制备和保存 1.1 试样制备 1.1.1 牛奶：取不少于500ｍＬ试样，装入清洁容器内，进行标记。 1.1.2 肉类、水产品、动物内脏：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于500ｇ试样。装入清洁容器内，进行标记。 1.1.3 蛋：从原始样品中，随机分出一半（不少于500ｇ），鲜蛋需去壳，进行标记。 注：制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 1.2 试样保存 1.2.1 牛奶：0℃～4℃保存。 1.2.2 肉类、水产品、动物内脏和蛋：试样于－18℃以下保存。 2、测定方法 2.1 方法提要 试样经压榨得到样液，样液加到含有一定数量的嗜热脂肪芽孢杆菌培养基中，64℃培养3ｈ～4ｈ。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有抗生素。 2.2 设备和材料 2.2.1 恒温箱：64℃±１℃。 2.2.2 离心机。 2.2.3 高速组织捣碎机。 2.2.4 均质器。 2.2.5 恒温水浴锅：８０℃。 2.2.6 涡旋振荡器。 2.2.7 肉类榨汁器。 2.2.8 克氏瓶。 2.2.9 安瓿。 2.2.10 可调移液器：１０μＬ～１００μＬ，１００μＬ～１０００μＬ。 2.3　菌种和培养基 2.3.1 菌种 2.3.1.1 嗜热脂肪芽孢杆菌 2.3.2 培养基 2.3.2.1 细菌保存及传代培养基：见附录Ａ第Ａ.１章。 2.3.2.2 增菌固体培养基：见附录Ａ第Ａ.2章。 2.3.2.3 检定培养基：见附录Ａ第Ａ.3章。 2.4　试剂 本标准所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水、去离子水，试验用水应符合ＧＢ／Ｔ6682的规定。 2.4.1 指示剂：溴甲酚紫，制法见附录Ａ.3.2。 2.4.2 甲醇。 2.4.3 标准溶液： 2.4.3.1 标准物质泰乐菌素：纯度≥９８％。 2.4.3.2 泰乐菌素标准储备液：100μｇ／ｍＬ。称取标准物质泰乐菌素10.0ｍｇ（精确至0.1ｍｇ），用甲醇溶解并定容至100ｍＬ，得到终浓度为100μｇ／ｍＬ的泰乐菌素标准储备液，置2℃～8℃冰箱中保存，可使用１个月。 2.4.3.3　泰乐菌素标准工作液：０.０５μｇ／ｍＬ。吸取一定量的泰乐菌素标准储备液，用甲醇稀释成０.０５μｇ／ｍＬ的泰乐菌素标准工作液，置2℃～８℃冰箱中保存，可使用１周。 2.5 测定步骤 2.5.1　样液制备 2.5.1.1　肉类、水产品、动物内脏：用肉类榨汁器榨汁，取大约2５０μＬ汁液作为待测样液。 2.5.1.2　蛋：取禽蛋液体至清洁容器中，均质后直接取样。 2.5.1.3　牛奶：直接取样。 2.5.2　菌悬液的制备 一般情况下，菌种的传代次数不应超过５代，否则在每次使用前确证其生化特性没有发生变异，或另需购置新的标准菌株。在确定保存的菌种生化特性没有改变后，将复活的菌种分别接种于盛有增菌固体培养基的克氏瓶中，５５℃±１℃培养72ｈ镜检芽孢数达８０％以上（如果达不到，可再培养数日，芽孢数量仍达不到要求，菌种可能变异，不可使用），用灭菌生理盐水洗下菌苔，使其悬浮于生理盐水中，８０℃水浴加热3０ｍｉｎ，2０００犵离心2０ｍｉｎ，弃上清液，用灭菌生理盐水重复洗涤芽孢两次。然后用灭菌生理盐水制成菌悬液，用稀释平板计数的方法或比浊法进行菌体计数以确定菌悬液的浓度，菌悬液中 菌体细胞的含量应达到１.０×１０８ＣＦＵ／ｍＬ。置2℃～８℃冰箱保存，贮存期１个月。 2.5.3　检定安瓿的制备 将嗜热脂肪芽孢杆菌菌悬液加入到融化后冷却至6０℃左右的灭菌检定培养基中，充分混匀，使培养基中嗜热脂肪芽孢杆菌的浓度达到１.０×１０6ＣＦＵ／ｍＬ。在灭菌安瓿中加入１ｍＬ混合液，保持水平待其凝固。取制备好的检定安瓿，加入１００μＬ０.０５μｇ／ｍＬ泰乐菌素标准工作液，室温放置2０ｍｉｎ后，64℃±１℃培养3ｈ～4ｈ，琼脂培养基颜色不变色，仍呈现紫色的安瓿为合格，达不到要求的安瓿应弃去。制备好的安瓿置2℃～8℃冰箱可保存１周。 2.5.4　测定 取制备好的检定安瓿，其中一个加入１００μＬ０.０５μｇ／ｍＬ泰乐菌素标准工作液作为阳性对照，一个加入１００μＬ阴性样品样液作为阴性对照。吸取１００μＬ待测样液加入检定安瓿中，将安瓿放置室温，20 ｍｉｎ预扩散；对于蛋、鱼、肾脏样品，预扩散后，需置于８０℃水浴加热１０ｍｉｎ。预扩散后，用蒸馏水洗涤安瓿两次，洗去待测样液，去除安瓿内剩余的水，用