选1.2.1微生物的实验室培养要点.pptVIP

3个划线平板 1个不划线平板 （重复实验） （空白对照） （3）培养 放入37℃恒温箱中培养12h～24h ①系列稀释操作： ②涂布平板操作： (1)概念与原理： 聚集的微生物 单个细胞 菌液梯度稀释 单个菌落 涂布平板 (2)操作： 生长繁殖 2、稀释涂布平板法 涂布器 ①系列梯度稀释操作 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 注意：移液管需要经过灭菌；试管口和移液管离火焰1～2cm处。 1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按101～106顺序编号。 2、用移液管吸取1ml菌液，注入101倍稀释的试管中。使菌液与水充分混匀。依次类推，直至完成最后一支试管的稀释。 注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1 ∽2cm处。 微量 移液器 ①系列梯度稀释操作 101 102 103 104 105 106 ②涂布平板操作： 1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 滴 2、取少量稀释液（不超过0.1ml ），滴加到培养基表面 灼 3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。 涂 4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 放入37℃恒温箱中培养12h～24h （3）培养 四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 课题1　微生物的实验室培养 专题2　微生物的培养与应用 微生物的类群 原生生物(如草履虫、衣藻等) 原核生物(细菌、蓝藻等) 真菌(如酵母菌、霉菌等) 病毒 无细胞结构 真核细胞 原核细胞 1、提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件 2、确保其它微生物无法混入 实验室培养微生物条件 ——培养基 ——无菌技术 1.基本成分： 思考：微生物“吃”什么？ 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4＋、NO3- 牛肉膏、蛋白胨、尿素等 注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 一、培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 培养基的营养构成:碳源、氮源、水、无机盐＋特殊营养物质 ⑶无机盐 Ca、K 、Mg为大量元素 Zn、Ca、Mn、Co、Mo等微量元素 ⑷水 2.特殊营养物质： 维生素、氨基酸、碱基等 （牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有） 3.pH、氧气、渗透压等的需求： 例如:生长因子(即微生物生长繁殖所必需的，而自身不能合成（或合成能力有限） 4.培养基的种类 固体培养基 液体培养基 有无 凝固剂琼脂 按物理状态不同划分: 液体培养基 固体培养基 用途 是否含凝固剂 种类 是 否 分离、计数、鉴定等 扩大培养、工业生产 液体培养基 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 选择培养基: 在培养基中加入（缺少）某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。用以菌种的分离。 4.培养基的种类 鉴别培养基: 在培养基中加入某种指示剂或化学药品。用以菌种的鉴别。 ③按用途不同划分: 例：大肠杆菌 伊红和美蓝培养基 菌落呈深紫色，并带有金属光泽 代谢产物 培养基中加氨苄青霉素 具有抗氨苄青霉素能力的菌落 选择出没有抗氨苄青霉素能力的细菌 选择培养基 培养基+氨苄青霉素 培养基 没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰 怎样选择出没有抗氨苄青霉素能力的细菌? 加入青霉素： 加入高浓度食盐： 不加氮源： 不加含碳有机物： 分离出酵母菌、霉菌等真菌(青霉素能杀死细菌、放线菌) 分离出金黄色葡萄球菌 分离出固氮菌 分离出自养型微生物 选择培养基举例？ 牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通