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2012级研究生生第四章 放射性核素标记化合物2012-11-16研讨
第四章 放射性核素标记化合物 第一节 概述 一、放射性核素标记技术和放射性核素标记化合物的含义 放射性核素标记技术 Radionuclide labeled technique 放射性核素标记化合物 Radionuclide labeled compounds 第四章 放射性核素标记化合物 第一节 概述 一、放射性核素标记技术和放射性核素标记化合物的含义 放射性核素标记化合物是化合物的分子结构中某一分子或原子被放射性核素原子取代后的化合物。 14C-尿素------14CO2 〔 γ -32P〕ATP 〔 1-14C〕乙酰胆碱 二、放射性核素标记化合物(一)放射性核素标记化合物的特点 结合牢固 有合适的放射性物理半衰期 容易测量 二、放射性核素标记化合物(一)放射性核素标记化合物的特点(二)同位素标记与非同位素标记 (1)同位素标记(isotopic labelling):被标记化合物中固有元素被其放射性核素的同位素取代所形成的标记。 有机化合物:14C 、3H 硫、磷化合物:35S 、 32P 特点:所得化合物的物理化学及生 物特性与原化合物基本相同 (2)非同位素标记(non-isotopic labelling) :非固有元素 131I---蛋白质、 125I---蛋白质 125I---类固醇激素 特点: 组成不完全相同 物理化学及生物特性有所改变 (三) 放射性核素标记化物的命名 无机化合物:131I-NaI、35S-硫酸 有机化合物:1-14C-醋酸 (1)定位标记(Specific labeling ) 5(S)-3H-尿嘧啶 (2)准定位标记(Normal labeling) 6,7(n)-3H-雌二醇 (3)均匀标记(Uniform labeling) U-14C-葡萄糖 (4)全标记 (General labeling) G-3H-胆固醇 (5)双标记或多标记 (Double labeling and multiped labeling) C3H3-35S-CH2CH2CH(NH2)-COOH 13CH3-14COOH 放射性比活度 Specific activity 放射化学纯度 Radiochemical purity (五)不稳定性 1.核衰变 2.辐射自分解 3.脱落 4.位移 第二节 蛋白质与多肽放射性碘标记 碘标记化合物的基本特性 125I、131I、123I: 半衰期、能量适宜 125I、131I:价廉易得 125I:易于探测 碘标记化合物的基本特性 一、蛋白质与多肽的放射性碘标记技术 特点:苯环比直链易于标记且稳定 (一)基本原理 形式:Na*I--*I- --- *I2 或 *I+ (二)常用标记方法 分类:直接标记法间接标记法 1.直接标记法(1)氯胺T法 原理: 次氯酸使*I-氧化 特点: 简便、快速 便宜易得、 标记效率高、 重复性好、反应易控制 是使用最广泛的碘标记技术 还原剂:偏重亚硫酸钠(焦亚硫酸钠) 1.直接标记法 (1)氯胺T法 氯胺T法注意事项 ① 氯胺T溶液应新鲜配制 ② 氯胺T 用量应严格控制 ③ 偏重亚硫酸钠也应新鲜配制、 1.5-2倍于氯胺T ④ pH7.4-7.8, 0.2-0.5M磷酸缓冲液 ⑤ 减少反应体积 ⑥ 反应时间:10s-3min ⑦ 室温进行 1.直接标记法 (2)乳过氧化物酶法 原理:当少量H2O2存在时,乳过氧化物酶与H2O2结合,释放出新生氧,使*I-氧化。 特点:反应十分温和 放射性比活度高 能保持生物和免疫活性 缺点:标记率比氯胺T法低,30%~40%。 还原剂:缓冲液或半胱氨酸或巯基乙醇 乳过氧化物酶法注意事项 ① H2O2应分次加入 ②乳过氧化物酶用量应控制 在标记蛋白量的1%以下 ③ 采用双酶标记法(葡萄糖氧化酶) ④ pH 3.0-8.0 ⑤反应时间:30-60min 1.直接标记法(3)固相氧化剂法 原理:将氧化剂交联在琼脂糖凝胶上或涂在塑料管或塑料
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