基于“浓缩计数”的菌落总数超快测量新法与装置研究研讨.docxVIP

科学论文 个人项目 基于“浓缩计数”的菌落总数超快测量新法与装置研究 高中 基于“浓缩计数”的菌落总数超快测量新法与装置研究 摘要：菌落总数的超快测量是水质监测工程师长期追求的目标，廉价的测试成本是制水企业和政府职能部门多年期待的。本文总结了现有菌落总数诸多测量方法，针对饮用水的特点：1、体量大，2、水分子直径为0.4纳米，细菌口径超过500纳米，远大于水分子直径，3、阻抗测量时需要将待测液在培养液中培养较长时间，使细菌浓度达到一定CFU值方可检出等等，结合市场调查，提出了基于“浓缩计数”而非传统“培养计数”的新方法，即基于微滤网聚束细菌，免除培养时间的超快速菌落总数电测方法。在新法指导下，设计了一款在线式测量装置、一款手动式廉价快速测量装置；实验验证了装置中关键件和操作的必要性，制定了后续工作方案，为装置的最终实现和方法验证奠定了良好基础。 关键词：细菌总数，阻抗法，超快速检测，饮用水，HEPA微滤网 一、引言 水的质量与安全向来是人们关心的重要问题。当今社会水质引起的事件越来越多[1~4]。但水质测量有其特点和难点：1、即便是受污染的水体，细菌在水体中所占比例的绝对值仍很小；2、饮用水中，细菌数量非常微小。根据GB17324-2003[5]的规定，每毫升水中菌落总数小于20CFU（见表1）。 表1 微生物指标 项目 指标 菌落总数/（CFU/mL） ≤ 20 大肠菌群/（MPN/100 mL） ≤ 3 霉菌和酵母/（CFU/mL） 不得检出 致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌） 不得检出 要对如此微小数量的物质进行测量，即便是精细的现代测试方法和设备均无法实现直接测量。通过培养方式提高细菌比例，加以反向推演测算方式，间接获取被测液体的细菌含量是目前水质测量的原则和基本方法。这导致现有测量方法和技术存在检测速度慢、操作复杂、无法在线实时检测、检测费用昂贵等问题。目前，正常检测时间需耗时24~48小时，低于24小时的方法属于快速检测法，但均难以满足人民生活、工业生产和政府公共卫生管理的需要。 低于1小时的超快速细菌总数检测方法，对其研究以及相关测量装置的研制变得十分迫切。 思考：目前细菌总数的快速测量普遍运用阻抗法。该方法的实质在于：对不同的细菌进行一定时间的培养，当CFU值达到阻抗法检测下限及之后，检测值出现明显变化。计算检测起始时刻到发生明显变化所需时长，根据不同菌落生长规律计算式，可反向推出细菌总数初始值。但是，多种类细菌存在时，各菌种所占比例的不同将影响阻抗法的精度。 图1 不同倍增时间对样品检测时间的影响[6] 表2常见细菌的倍增时间／代时[6] 仔细分析，阻抗法存有两大缺陷：1.需要培养。这将导致一些列问题，如培养液选择、操作复杂、测试费用昂贵、无法在线直测等诸多问题；2.测量时间长，需以百分钟计算。上述缺陷触发了作者对新检测方法的研究。详情如下： 本文首先总结了当代菌落总数测量原理与方法，针对饮用水的特点：1、体量大，2、水分子直径为0.4纳米，细菌口径超过500纳米，远大于水分子直径，3、阻抗测量时需要将待测液体在培养液中培养较长时间，使细菌浓度达到一定CFU值方可检出等等，在市场调研基础上，提出了基于“浓缩计数”而非培养计数的新方法，即基于微滤网聚束细菌，免除培养时间的超快速菌落总数电测方法。在新方法指导下，设计了一款在线式测量装置、一款手动式廉价快速测量装置；实验验证了装置中关键件和操作的必要性，制定了后续工作方案，为装置的最终实现和方法验证奠定了良好基础。 二、当代菌落总数测量原理与方法[6] 目前已报道的微生物检测方法有很多，但国际上普遍认可的标准方法是传统的培养计数法，其它新技术正逐渐发展与完善中。上文介绍的阻抗法即属“培养计数法”的分支。 1996年Hobson等将微生物检测技术分为生物电化学和非生物电化学两大类。前者包括阻抗，电导法、电势测定法、燃料电池技术、循环/方波伏安法、电流分析法等检测由微生物引起的电极间电荷转移信号的一类方法。后者包括干重、活菌计数和浊度等传统方法，还包括一些特殊技术，如：微量热法、荧光．抗体技术、辐射测量法、生物发光法、压电薄膜法等等，以及检测核酸、蛋白质、脂类衍生物、碳/磷酸盐、新陈代谢酶等细胞成分的方法。 2000年Ivnitski等又将细菌检测技术分为：培养计数法、显微镜观察计数法等一般方法；用压电晶体、阻抗仪、氧化还原反应、光学技术、量热法、超声波技术等检测物理量的方法；检测ATP(生物发光)、DNA、蛋白质、脂类衍生物(生物化学方法)、放射性同位素(辐射度量学)等细胞成分的方法。 2003年Aloci|ja和Radke分析了美国国内致病菌检测技术的市场前景。 2004年Deisingh和Thompson将检测传染性细菌