2.3纤维素的微生物的分离程序.pptVIP

课题3 分解纤维素的微生物的分离 1.简述纤维素酶的种类及作用； 2.掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术； 3.分析分离分解纤维素的微生物的实验流程； 4.掌握实验操作的原理。 首先讲述纤维素的化学组成以及纤维素在生物圈的广泛分布，由此转入到如何对纤维素进行有效利用的问题。接着介绍了产纤维素酶的微生物能够分解纤维素，从而引出对纤维素的利用离不开对分解纤维素的微生物的研究。 本专题重在培养学生的创新思维，要求学生通过自己设计实验方案，并按照自己的实验方案进行主动探究，从而得出结论，有利于培养学生的观察能力、分析能力和逻辑推理能力。 　　阅读课本27页基础知识部分第一、二段，回答下列问题： 1. 纤维素在生物圈的分布状况？ 　　纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 一、纤维素和纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、 CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶 Cx酶 葡萄糖苷酶 2.纤维素酶的组成及作用 在一支试管中添加纤维素酶， 另一支试管不添加纤维素酶； 实验分析：P27-28的小实验是如何构成对照的？ 滤纸崩溃法 3.纤维素分解菌的筛选(学生阅读P28回答如下问题) 1.筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。 刚果红染色法 颜色 2.其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被_________分解后， 红色复合物无法形成，出现以_____________ 为中心的________，可以通__________________来筛选纤维素分解菌。 红色复合物 纤维素酶 纤维素分解菌 透明圈 是否产生透明圈 可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 二、实验设计(根据P28-29思考并回答) 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别培养基 挑选菌落 什么样的环境取样? ① 培养的目的? ②选择培养基的特点? 挑选什么样的菌落? ①鉴别培养基的特点? ②如何鉴别? 根据：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找； 目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物； 刚果红染色法 1.纤维素分 解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因_____________ 【资料二】选择培养 阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题： 液体 没有添加琼脂 2.该培养基对微生物_____（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是: 具有 以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖； 若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将__________改为_________。 3.你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？ 葡萄糖 纤维素粉 培养基组成 提供的主要营养物质 CMC-Na 5-10g 碳源 酵母膏 1g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25g 无机盐 土豆汁 100mL 碳源、生长因子 琼脂 15g 凝固剂 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 氢元素、氧元素 鉴别纤维素分解菌的培养基 (水溶性羧甲基纤维素钠) 【资料三】刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。 方法二：在倒平板时就加入刚果红。 染色法 优点 缺点 方法一 方法二 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便，不存在菌落混杂问题 产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 思考：这两种方法各有哪些优点与不足 挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯培养。 三、结果分析与评价 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。 为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_______________实验，纤维素酶的发酵方法有______ 发酵和______ 发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的________ 含量进行定量测定。 发酵产纤维素酶 液体 固体