现代生物科技专题-知识结构整理-教师版.docVIP

2010版高考生物知识结构整理 现代生物科技专题 一 基因工程 基因工程的基本原理与技术（I） 工具酶的主要类型、特性及作用 基因工程又叫DNA重组技术。这种技术是按照人们的某种意愿，在生物体外（外/内）把一种生物的个别基因复制出来，加以改造，然后导入另一种生物的细胞中（受体细胞）内进行无性繁殖，定向（定向/不定向）的改造生物的遗传性状。 1．原核细胞基因与真核细胞基因结构的比较： 基因都有编码区和非编码区，都有启动子（RNA聚合酶的结合位点）。 图甲表示原核生物的基因，图乙表示真核生物的基因。两者的区别在于前者的编码区是连续的，其中没有内含子和外显子。图乙中的E是编码区，g是启动子，k是内含子，I是外显子。 2．基因工程的工具是限制性核酸内切酶（限制性内切酶、限制酶）、DNA连接酶和载体。 3．限制酶是从原核生物中分离纯化出来的。每种限制酶只能识别双链DNA分子中的特定（特定/所有）的脱氧核苷酸序列，并且切点一定（一定/不一定），因此限制酶具有特异性。DNA分子经切割后产生的DNA片段末端有两种形式——黏性末端和平末端。限制酶的切割位点是磷酸二酯键。 4．被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键是由DNA连接酶连接起来的。 E.coliDNA连接酶只能连接互补的黏性末端，而T4DNA连接酶能够连接黏性末端和平末端。 5．作为载体必须具备的条件是有多个限制酶的切点、有标记基因和能够在宿主细胞中稳定复制。基因工程常用的载体是质粒，除此以外还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 基因工程的操作步骤 1．基因的工程的基本步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建（将目的基因与运载体结合）、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与表达。 2．提取目的基因的方法有多种，一是从基因文库中获取目的基因，根据里面所包含基因的不同，可以分为基因组文库和部分基因文库，cDNA文库属于部分基因文库，其特点是基因中无内含子； 二是在体外利用PCR技术扩增目的基因，该技术全称为聚合酶链式反应，具体过程中需要引物、热稳定性DNA聚合酶（Taq酶）、四种dNTP和模板DNA； 另外一种方法是人工合成基因（化学合成基因）。 3.基因表达载体的构建： 目的基因与运载体在生物体外（内/外）结合形成重组DNA分子。一个载体除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因。 4．将目的基因导入受体细胞： 基因工程常用的受体细胞有大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌、动植物细胞等。用人工的方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞中主要是借鉴细菌或病毒的侵染途径。将目的基因导入微生物细胞的常用方法是用Ca2+处理细胞使其变为感受态细胞；植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，除此以外还可以利用基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射技术，具体做法是将目的基因注射到受精卵中，经胚胎早期培养后，再移植到雌性动物的子宫中发育成转基因动物。 农杆菌转化法的过程中实际包含了两次导入的过程，第一次是将重组质粒导入土壤农杆菌，第二次是利用农杆菌的特性使其Ti质粒上的T-DNA（其上携带了目的基因）整合到植物细胞的染色体DNA上。农杆菌侵染的原理是植物体收到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，完成侵染的过程。 5．目的基因的检测与鉴定：检验生物染色体DNA是否插入了目的基因，利用DNA分子杂交技术；检验目的基因是否转录出了mRNA，利用的是DNA-RNA分子杂交技术；检测目的基因是否表达出蛋白质，利用抗原-抗体杂交；有时还需要进行个体生物学水平的鉴定，如检测生物是否具备相应的性状。 应用与前景 1. 在植物基因工程领域，已经成功培植了抗虫、抗病、抗逆转基因植物，还能够利用转基因改良植物的品质；在动物基因工程方面，利用转基因技术可以提高动物生长速度、改善畜产品的品质、用转基因动物生产药物、以及用转基因动物作器官移植的供体；另外，基因工程药物以及基因治疗都有相当的前景。 2. 蛋白质工程: 利用基因工程技术，对天然的蛋白质进行改造，以便获得具有理想生物学功能的蛋白质。 天然蛋白质合成的过程是按照中心法则进行的，其过程表现为DNA-mRNA-蛋白质 蛋白质工程的基本途径：预期蛋白质功能 设计蛋白质的结构 推测氨基酸序列 找到相应的脱氧核苷酸序列 目的基因 　　 基因工程获得蛋白质 基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，而利用蛋白质工程可以获得全新的蛋白质。 二 克隆技术（细胞工程） 克隆的定义和理论基础（II） 克隆是指无性繁殖的过程，即由一个个体（或细胞）经过无性繁殖后所形成的子代群体。属于克隆的包括植物组织培养、动物细胞培养、单克隆抗体的制备、菌落的形成。 细胞的全能性是指已经高度分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能（细胞→个体），能