重组和转座解释.pptVIP

第一节 重组的分类 一、Homologous recombination?(generalized recombination) ： 同源重组或普遍性重组 依赖于参与重组的DNA分子在序列上的广泛一致性 经常发生于减数分裂期的同源染色体之间 二、Site-specific recombination?(Specialized recombination) ： 位点特异性重组 这种重组的特点是重组发生在特异位点，此位点含有短的同源序列,供位点特异性重组酶识别 如 λ噬菌体DNA整合到寄主DNA 三、转座： refers to the movement of a transposon to a new site in the genome A transposon?(transposable element) is a DNA sequence able to insert itself (or a copy of itself) at a new location in the genome, without having any sequence relationship with the target locus. 转座的机制依赖DNA的交错剪切和复制，但不依赖于同源序列。转座涉及转座酶、解离酶识别重组分子中的短特异序列，共分为复制型、非复制及保守型三种类型 四、模板选择（copy chioce）性重组，适用于RNA病毒，在这种重组中，聚合酶从一个模板转换到另一个模板来合成RNA，结果新合成的分子将含有两个不同亲本的遗传信息 第二节 同源重组 一、Holliday连接： 在同源染色体的相同位点产生切口 两条染色体的DNA链发生交叉 切口封闭，形成holliday junction(或chi结构) Branch migration（分枝迁移） 在两对同源链的其中任意一对上产生切口，拆分中间体 二、Rec BCD途径 －同源重组的酶学机制 Rec BCD蛋白在chi位点3’侧的一条链上产生切口。 Rec BCD蛋白同时具有解螺旋酶的活性，使chi位点附件切口的DNA解链 单链区被Rec A蛋白和SSB蛋白覆盖 RecA 蛋白使单链DNA取代双链DNA中的同源部分 D－loop区域的DNA产生切口，新切口的3’端（ the tail of newly nicked DNA ）与另一条DNA的单链区互补配对 DNA连接酶封闭切口，形成Holliday junction RuvA 和RuvB发动迁移反应 RuvC拆分重组中间体 The RecBCD complex has nuclease and helicases activities. It binds to DNA downstream of a chi sequence, unwinds the duplex, and degrades one strand from 3’ –5‘ as it moves to the chi site. The chi site triggers loss of the RecD subunit and nuclease activity. it continues to function as a helicase, now using only the RecB subunit to drive translocation, at about half the previous speed RuvA可识别Holliday连接的结构；RuvB是一种ATPase，它可发动迁移反应。右图表示复合体的功能。 RuvA结合在交换点上的所有4条链上。RuvB是六聚体，它围绕在交换点上游的每一条DNA双链的周围。 ruvC编码一个可特异识别Hollidy分枝结构的内切酶，该酶可切开Holliday 连接体，解离重组中间体。 三、基因转换： 在不发生基因重组的情况下，具有两种不同颜色的孢子按4：4的比例出现 发生基因重组时，错配修复系统能够识别异源双链的不配对区，并以其中一条链为模板修复另一条链。 第三节 位点特异性重组 位点特异性重组最典型的列子是λ噬菌体对E.coli的整合。在裂解周期，λ DNA是以环状分子独立存在于细菌的细胞质中；在溶原化状态时的λDNA是整合在细菌的染色体中。称为原噬菌体。通过位点特异性重组这两种状态是可以相互转变的。 进入溶原状态时游离的λDNA必须整合（intergrated）到宿主的DNA中；从溶原周期进入裂解周期时原噬菌体DNA须从宿主的染色体中切离出来。 ? 噬菌体λ的整合和切离是在特异位点即附着位点(attatchment sites, att ) 通过重组完成的，