课题DNA初提取与分离.docVIP

课题：DNA的初提取和鉴定 教学目标： 1、知识与能力目标 理解DNA的理化特性及根据其理化特性而提取和鉴定的原理，初步掌握DNA的粗提取和鉴定方法，理解相关溶液的作用机理，培养学生的分析能力，通过实验使学生能够简述科学探究的基本过程。 2、情感态度与价值目标 通过探索培养科学的怀疑精神和创新精神；通过实验结果，学生树立生命物质性的观点。 教学重点：提取DNA的相关原理和步骤 教学难点：提取DNA的相关原理和步骤 教学过程： 开门见山： 讲解本实验的目的是提取DNA和DNA的鉴定，其中提取DNA是本实验的重点和难点。 提出问题：“DNA主要存在于什么结构上？”“如何提取DNA？”“选什么材料好？” 达成共识： 1、造适宜材料：选动物细胞，易打破细胞结构 2、破坏细胞膜、核膜结构，得核物质。 3、将DNA与蛋白质等物质分开，得DNA 4、去掉DNA中杂质，提纯DNA。 探究实验原理： 屏幕展示表格1 NaCl2mo1/L NaC10.14mo1/L NaC10.015mo1/L DNA 蛋白质 表格2 ? DNA 蛋白质 杂质 95%酒精 不同浓度的NaC1溶液可溶解或析出DNA。95%酒精可提取DNA。 填表1： NaCl2mo1/L NaC10.4mo1/L NaC10.015mo1/L DNA 最大 最小 变大 蛋白质 解聚 最大 变小 填表2： DNA 蛋白质 杂质 95%酒精 不溶 可溶 可溶 通过对实验原理的预习，表格的比较，使学生明确了各溶液的用途，保证理解实验。 请学生代表简述DNA提取实验步骤[实验设计一] 投影展示实验设计思路： 鸡血细胞液①aDNA 释放 ②bDNA与蛋白质的分离 ③cDNA析出④dDNA浓缩（提纯） 获得鸡血细胞核物质：提核物质→溶解→析出→溶解→析出 实验步骤： 引导学生讨论、回忆并回答目的①~⑨。 ①防止血凝。 ②加速血细胞破裂。 ③溶解DNA。 ④使2 mol/L的NaCl溶液稀释至0.14 mol/L，促DNA最大限度地析出。 ⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上。 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质。 ⑧提取DNA。 ⑨A：出现蓝色。B：无变化 讨论与结论： 投影给出如下讨论提纲，供学生讨论。 （1）DNA粗提取过程中的关键是哪几步？ （2）提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？ （3）DNA的直径约为2 nm，实验中出现的丝状物的粗细是否表示一个DNA分子直径的大小？ 学生分组进行讨论并发表讨论结果。教师对讨论进行全程指导，并与学生一起归纳总结。 （1）a．提取鸡血细胞的核物质。应用低渗原理和机械搅拌，可得到最大量的DNA。 b．析出DNA黏稠物。加蒸馏水要慢，搅拌要轻。 c．沉淀DNA时，必须用冷酒精。 （2）提取DNA，去除杂质是关键。由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去（含蛋白质）。 （3）实验中出现的丝状物是肉眼可以观察到的，这种丝状物的直径要比DNA分子的直径2 nm大许多倍，所以实验中出现的丝状物并不表示一个DNA分子的直径。 实验结论：细胞中有DNA，DNA遇二苯胺试剂在沸水浴中变蓝色。 教学目标巩固 1．实验中步骤1和步骤3都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗？为什么？ 2．实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol/L和0.14 mol/L 对DNA有何影响？ 3．DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成 A．砖红色　B．橘黄色　C．紫色 D．蓝色 补充知识： 1、鉴定DNA的其他方法 用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。 1．配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭（EB）溶液。 2．将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色。 3．将蜡纸放在紫外灯（260 nm）下照射（暗室中），可见橙红色的萤光（DNA的紫外吸收高峰在280 nm处）。 2、DNA粗提取与鉴定的另一种方法 1．材料用具 新鲜菜花（或蒜黄、菠菜）。 塑料烧杯，量筒，玻璃棒，尼龙纱布，陶瓷研钵，试管，试管架，试管夹，漏斗，酒精灯，石棉网，三角架，火柴，刀片，天平。 研磨液，体积分数为95%的酒精溶液，二苯胺试剂，蒸馏水。 2．方法步骤 A．DNA的粗提取 （1）准备材料：将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室，至少24小时。 （2）取材：称取30 g菜花，去梗取花，切碎。 （3）研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。 （4）过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液滤入烧杯中（有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000 r/min 的旋转频率，离心2~5 min；取上清液放入烧杯中）。在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上