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第三章  动植物细胞培养产酶 主要内容 植物细胞培养产酶 动物细胞培养产酶 要求 了解动、植物细胞及其培养的特点； 熟悉动、植物细胞培养的工艺条件及其控制。 一、概述 1.什么是动、植物细胞培养？ 二、植物细胞培养产酶 1、从现成植物材料中提取酶的一般步骤 2、植物细胞培养 3、植物细胞培养产酶的工艺特点 培养基 三、动物细胞培养产酶 1、动物细胞培养的特点 （1）主要用于功能蛋白质和多肽的生产 （2）生长较慢，15-100h （3）需要添加抗生素以防染菌 （4）无细胞壁，体积较大，对剪切力敏感，要求严格控制培养条件如通风、搅拌、pH、渗透压等 （5）大部分动物细胞有锚地依赖性，需要贴壁培养 （6）培养基成分复杂，分离纯化复杂，成本较高，多用于高价值药物的生产 （7）原代细胞培养50代之后即会退化死亡，需要重新分离细胞 2、动物细胞培养方式 悬浮培养 血液、淋巴组织的细胞 贴壁培养 成纤维细胞型（fibroblast） 上皮细胞型(epithilium cell type) 游走细胞型(wondering cell type) 多形性细胞型 (polymorphic cell type) 固定化细胞培养 3、动物细胞培养的工艺条件及其控制 （1）动物细胞获取过程： 3、动物细胞培养的工艺条件及其控制 （2）动物细胞培养基的组成成分： * * 第三章 动植物细胞培养产酶 动植物细胞在体外条件下的存活或生长。 2.如何获得动、植物细胞？ 动物细胞 ：离心分离、杂交瘤技术、胰蛋白酶消化处理。 植物细胞：机械捣碎或酶解、诱导愈伤组织、原生质体细胞 壁再生。 3.动、植物细胞培养方式？ 动物细胞 ：悬浮、贴壁和微载体 植物细胞 ：固体、液体浅层和液体悬浮培养。 4.动、植物细胞培养目的？ 动物细胞 ：疫苗、激素、多肽药物、单克隆抗体、酶、皮肤等人体组织、器官等功能性蛋白质。 植物细胞 ：色素、药物、香精、酶等次级代谢物。 尿激酶、胶原酶、纤维素蛋白酶激活剂、胃蛋白酶、胰蛋白酶 酶(enzyme) 促滤泡激素、生长激素、促间质细胞激素、促黄体激素 激素(hormone) 干扰素、白细胞活化因子、转移抑制因子、胸腺素 免疫调节剂 ReoPro 、Rituxan 单克隆抗体 牛病毒性腹泻、犬传染性肝炎、犬瘟病、口蹄疫、猪霍乱、草鱼出血病 动物 小儿麻痹症、风疹、脑炎、乙肝表面抗原、疱疹、狂犬、某些癌症 人 疫苗 (vaccine) 例：动物细胞培养获得的产物 麻醉剂、镇痛剂 650 可特因 香料 1125 苦橙花油 香料、药物 500 春黄菊油 香料 500-2000 茉莉 香料、中药 800 当归根油 麻醉剂、镇痛剂 600 吗啡 强心碱 600 辅酶Q-10 抗肿瘤药物 3500000 长春化碱 抗肿瘤药物 1000000 长春新碱 用途 价格（美元/kg） 名称 例：植物细胞培养获得的产物 低 低 较高 细胞或产物浓度 有时使用 不常使用 广泛使用 传统变异、筛选 高 非常高 低 剪切力敏感 有 有 无 细胞分化 能忍受广泛范围 非常敏感（无细胞壁） 能忍受广范围 环境敏感 内部、激素 内部、激素 内部 代谢调节 慢，24-74h 慢，15-100h 快，0.5-5h 生长速率 较复杂 非常复杂 简单 营养要求 可以，易成团 大部分附着 可以 悬浮生长 20-300 10-100 1-10 大小（μm） 植物细胞 动物细胞 微生物 项目 动、植物细胞培养和微生物细胞培养比较 1、从天然植物材料中直接提取 2、从大规模培养的植物细胞中提取 取材→预处理→加提取液捣碎→离心或过滤除去固体物， 收集粗酶液→适当浓缩→纯化→成品加工 2、植物细胞培养 在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体 培养基中，进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞， 通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种 技术。 （1）植物细胞培养特点 1）提高产率 2）缩短周期 3）易于管理、减轻劳动强度 4）提高产品质量 5）其他 对剪切力敏感、生产周期长、生长和代谢需要一定的光照。 （2）植物细胞培养的工艺流程 外植体的选择和处理→愈伤组织的诱导→ 细胞的获取→细胞培养→分离纯化→产物 外植体的选择与处理： 选择外植体、切取片段、消毒处理。 植物愈伤组织 直接分离法 机械捣碎发：动作轻柔 酶分解法：纤维素酶、果胶酶等 过滤、离心分离 愈伤组织诱导法 能迅速增殖、无特定结构和功能的薄壁细胞团 外植体 半固体培养基 灭菌、冷却 生长素、分裂素 插入 培养 25℃ 愈伤组织 1-3周 分散、接种 原生质体再生 去除细胞壁后得到的微球体 （1）植物细