真菌DNA提取试剂盒.docVIP

真菌DNA提取试剂盒Fungal DNAout 货号:M090091 产品及特点本产品用于快速提取各种真菌的基因组DNA，其中包括酵母（如：Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pomb、Pichia pastoris）、动物病原真菌（如：Candida albicans、Aspergillus niger）和植物病原真菌（如：Collectotrichum musae、Fusarium oxysporum）。本产品的主要特点是： DNA纯净，OD260/280一般都在1.9左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。DNA 大小在50 Kb左右。 操作简单，整个过程约30分钟左右，比大多数同类产品短。 液体培养物处理量在0.1-3 mL 之间，真菌菌丝、孢子、子实体的处理量在0.1-0.5 g之间。 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。 安全无毒，不需要使用氯化苄等有毒物质，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。 规格及成分 成份 0次包装 （CAT：） 溶液A 0 mL 溶液B 0 mL RNase A溶液 50 uL 使用手册 1份 运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。使用方法先将全部RNase A溶液全部加入到50 mL溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在4℃保存。 称取0.1-0.5g湿的真菌菌丝、孢子、子实体或0.1-3 mL液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA会吸附在表面，影响得率。如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量最好比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化 如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份 ，请按相关的标准方法先将该真菌预纯化出来，以沉淀物的形式放液氮研磨。 在离心管中加入1 mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀（如果溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用）。 65℃保温5-30分钟，其间最好吹打混匀2-3次。 12000-15000 g室温离心3分钟，将不超过0.75 mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状，将其置于冰浴中放置5-10分钟。 12000-15000 g室温离心3分钟，转移上清到新离心管中。 加入0.2 mL的氯仿 自备 ，震荡器上充分振荡30秒混匀。 12000-15000 g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新离心管中。 重复第7-第8步操作一次。 加入0.6-1倍体积的异丙醇 自备 ，上下颠倒30秒混匀，12000-15000 g离心5分钟，弃上清，管底将有微小DNA沉淀。 用1 mL 70%乙醇清洗沉淀2次后（一次洗涤是指加入70%乙醇震荡，12000-15000 g 室温离心3分钟，小心吸弃上清），再短暂离心一次，吸弃残留的液体（约50uL。吸出残留的乙醇很重要，否则它会严重影响后续的电泳上样、酶切、杂交等实验）。 加入50-100 μL自备缓冲液 如TE 和5-15 uL RNase A溶液溶解沉淀 由于基因组DNA较大，一般需要过夜溶解 。DNA即可用于电泳，酶切和PCR等反应。如果需要测OD，则必须乙醇沉淀去除降解的RNA。 技术咨询电话：400-607-9999 注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途