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流式细胞仪在口腔临床 免疫学中的应用 徐 骎 口腔临床免疫学教研室 口腔肿瘤生物实验室 什么是流式细胞仪 概 况 细胞免疫功能检测 ——T细胞亚群、 B细胞、 NK细胞 检测原理 不同功能的免疫细胞表面表达不同种类的特征性分子 CD ？ 细胞表面分化族 (cluster differentiation, CD) T细胞表面分化族的不同分为: 总T淋巴细胞(CD3+) 辅助T淋巴细胞(CD3+CD4+) 抑制T淋巴细胞(CD3+CD8+) 细胞表面分化族 (cluster differentiation, CD) B细胞表面分化族: CD19+ NK细胞表面分化族: CD16+/ CD56+ 免疫细胞检测原理 利用荧光素或酶等标记细胞，用荧光显微镜或流式细胞仪观察到标记细胞，从而达到检测目的细胞的目的 流式细胞仪简介 流式细胞仪（Flow Cytometer,FCM) ——集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体 能对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数的、快速的、定量分析和分选。 流式细胞仪已成为当今对细胞生物学特性进行分析检测的理想工具 流式细胞仪结构 分为五部分： 流动室及液流驱动系统 激光光源（488nm及635nm)及光速成形系统 光学系统 信号检测与分析系统 细胞分选系统 流式细胞仪信号检测与分析 ——散射光信号 不依赖任何细胞样品的制备技术，被称为细胞的物理参数 1）前向角散射（Forward Scatter,FSC)： 与被测细胞大小有关 2）侧向角散射（Side Scatter,SSC)： 对细胞膜、胞质、核膜的折射率敏感 流式细胞仪信号检测与分析 ——荧光信号 激光光束与细胞正交时，产生两种荧光信号 1）细胞自发荧光 2）细胞上特异荧光素受激光照射得到的 荧光信号 荧光染料有PI 、 PE 、 FITC 、 PerC 、 CY5等 设“门”分析（Gating analysis) 通过设“门”，设置各种参数的相关信息，确定并分析所选的目标细胞群的各种数据 流式细胞仪检测免疫细胞流程 样品制备（详见操作手册） 上机检测，同时结果分析 报告打印 健康人淋巴细胞亚群正常值 CD3 59.4~84.6% CD19 6.4~22.6% CD4 28.5~60.5% CD8 11.1~38.3% CD4/CD8 0.9~3.6 CD16/56 5.6~30.9% 小 结 流式细胞仪工作原理 淋巴细胞不同亚群细胞表面分化族（CD） 健康正常人淋巴细胞亚群的正常值范围 （流式细胞仪检测法） * * 原理 荧光染料种类 ●流式细胞仪实物 BD FACSVantage BD-Calibur 流式细胞仪工作原理
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