C4单抗与基因工程抗体2009重点分析.pptVIP

在体内免疫治疗中的应用 抗体分子可与放射性核素、细胞毒药物、毒素、等多种分子相融合，这些分子在抗体结合靶分子后可提供重要辅助功能 双功能抗体可有效针对低水平的肿瘤相关抗原，并将细胞毒物质输送到肿瘤细胞 抗体还可与携带药物的脂质体、各种PEG偶联，从而增强体内运输和药代动力学 六、抗体库技术的应用和前景 在肿瘤体外诊断中的应用 在肿瘤诊断中的应用 在肿瘤治疗中的应用? 目的要求 了解：单克隆抗体在医学上的应用、 抗体库技术及其应用。 熟悉：单克隆抗体制备的基本步骤、 基因工程抗体的制备技术。 掌握：杂交瘤技术的原理、单克隆抗体、 基因工程抗体、杂交瘤细胞的概念。 名词解释：单克隆抗体、基因工程抗体、人源化抗体、小分子抗体、转染。 问答题： 1.单克隆抗体与多克隆抗体的主要异同？ 2.简述杂交瘤技术的基本原理。 3.小分子抗体有何优点？ 4. HAT培养基指什么？其筛选杂交瘤的作用机理？ 思 考 题 * * * Mabthera利妥昔单抗 利妥昔单抗是一种嵌合鼠/人的单克隆抗体，该抗体与纵贯细胞膜的CD20抗原特异性结合。此抗原位于前B和成熟B淋巴细胞，但在造血干细胞，后B细胞，正常血浆细胞，或其他正常组织中不存在。该抗原表达于95%以上的B淋巴细胞型的非何杰氏淋巴瘤。在与抗体结合后，CD20不被内在化或从细胞膜上脱落。CD20不以游离抗原形式在血浆中循环，因此，也就不会与抗体竞争性结合。利妥昔单抗与B淋巴细胞上的CD20结合，并引发B细胞溶解的免疫反应。细胞溶解的可能机制包括补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。此外，体外研究证明，利妥昔单抗可使药物抵抗性的人体淋巴细胞对一些化疗药的细胞毒性敏感。  * * * * 非何杰金淋巴瘤的单抗治疗，使用单抗后，恶性B细胞被破坏 CDR序列 CDR序列 鼠单克隆抗体 人抗体 人源化抗体（该型抗体） (二) 人改型抗体（CDR移植） 鼠单克隆抗体V区的人源化 （三）人源抗体 完全人源化抗体又称全人抗体，是 治疗性抗体最理想的形式。目前，基因工 程制备全人抗体主要通过抗体库技术与转 基因小鼠技术而获取。 二、小分子抗体 概念：是分子量小但具有抗原结合能力的片段。 类型：抗原结合片段（Fab）、可变区片段（FV）、单链可变区片段(ScFv)、单区抗体(SdAb)和纳米抗体等。 特点：分子量小，穿透性强；不含Fc段，副作用少；半衰期短，有利于及时中和及清除毒素；可在原核系统表达及易于基因工程操作。 二、 小分子抗体 1抗原结合片断 2 可变区片断 3单链抗体 免疫球蛋白 基因载体的构建 H链表达载体 L链表达载体 共转染细胞 pr VH CH1 Pr VL CL Fab 抗体分子的制备 抗体分泌细胞 VH VL CL -S-S- CH1 Fab 抗体分子的制备 可变区片断 ds-Fv [二硫键稳定的Fv ]小分子抗体的制备 分别构建载体 L链表达载体 H链表达载体 共转染细胞 Pr VH Pr VL 抗体分泌细胞 VH VL -S-S- ds-Fv小分子抗体的制备 VH VL 接头DNA (Gly4Ser)3 VH引物 PCR VH 接头DNA 酶切、克隆 单链抗体（ScFv )的构建——基因工程技术 变性、复性 VL引物 VL 三、抗体融合蛋白 ?抗原结合部位与生物活性蛋白结合 四、双特异性抗体 六、噬菌体抗体库技术 抗体库技术——是指用基因克隆技术将全套抗体VH和VL 克隆出来，重组到噬菌体载体，通过工程菌（原核系统）直接表达有功能的抗体分子片段，最后通过多种选择手段筛选出特定性能的抗体基因。 应用：抗感染，抗肿瘤，抗独特型抗体 抗体库技术产生的三项技术基础 ? RT-PCR：能够克隆全套抗体可变区基因 ? 抗体基因片段在工程菌的功能性表达 ? 噬菌体（丝状）展示技术 接头DNA VH VL 噬菌体表面呈现的小分子抗体 基因III或基因VIII 外壳蛋白 VH VL 抗体库的构建 抗体库的富集筛选 单克隆抗体在医学中的应用 1、临床检测各种病原体、肿 瘤抗原等 2、检测淋巴细胞的表面标志 3、机体微量成分的测定 4、抑制器官移植排斥 5、治疗自身免疫疾病 6、生物导弹 7、亲和层析中重要的