微核试验.pptVIP

微核成因 原理 基因突变和染色体畸变的检测可直接反映化学毒物的致突变性,是评价化学毒物致突变性唯一可靠的方法。但是还有许多试验所观察到的现象并不反映基因突变,染色体畸变和染色体分离异常，而仅反映致突变过程中发生的其他事件。 原理 微核(Micronucleus):产生与染色体损伤有关 微核是染色体或染色单体的无着丝粒断片或纺锤丝受损而丢失的整个染色体，在细胞的有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中，它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞的胞质内而形成，由于比核小得多故称微核。 化学致突变物 染色体 作用于纺锤丝 无着丝点,片或环 整条染色体 带着丝粒的环和断片 于细胞分裂末期细胞质中 形成微核 原理 微核试验(Micronucleus test，MNT)是观察受试物能否产生微核的试验。它能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点，其主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。人和动物的微核测试多用骨髓和外周血细胞，这需要一定的培养条件与时间，细胞同步化困难，微核率低，一般只在0.2%左右。 原理 丝裂霉素C 操作步骤 1、试验动物及处理 动物选择：一般常用的试验动物为大、小鼠。以小鼠使用最为广泛，要求体重18~20g，7~12周龄。每组小鼠数量10只，雌雄各半。 操作步骤 (2) 染毒途径：根据研究目的或受试化学毒物性质的不同，可分别选用经口、经皮、经呼吸道及注射等染毒途径。但原则上应尽可能采用与人体接触化学毒物相同的途径。 操作步骤 (3) 染毒次数及取样时间：采用两次染毒的方式，即第一次 染毒24小时后，进行第二次染毒，6小时后取样。 操作步骤 (4) 剂量选择：受试物应至少设三个剂量组，最高剂量组原则上为不产生动物死亡的最大毒作用剂量。一般取受试样品1/5、1/10、1/20 LD50 剂量。阳性对照组用丝裂霉素C(10mg/kg)腹腔注射1次或2次。阴性对照组使用等体积的溶剂。 操作步骤 2、骨髓液的制备和涂片 试验动物最后一次染毒后，按确定的时间用颈椎脱臼或麻醉的方法将其处死，四肢固定于解剖板，将腹中线被毛浸湿，剖开胸腹部，取下胸骨(或股骨），擦净血污，剔去肌肉，剪去骨骺。用小型弯止血钳将骨髓挤于有一滴小牛血清的清洁载玻片上，混合均匀后推片。 3、固定 将推好晾干的骨髓片放入染色缸中、用甲醇溶液固定15min取出晾干。不能及时染色的涂片也应固定后保存。 4、染色 将固定晾干后的涂片、用新鲜配制的Giemsa应用液(Giemsa储备液1份加PH6.8的磷酸盐缓冲液9份)染色10~15min，然后冲洗掉玻片上的染色液，置晾片架上晾干。 5、观察计数 先在低倍镜下进行观察，选择分布均匀．染色较好的区域，再在油镜下观察计数，PCE细胞呈灰蓝色，正染红细胞(NCE)呈橘黄色。细胞中含有的微核多数呈圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。一个细胞内可出现一个或多个微核。计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。 MN NCE 结果与分析 微核试验所获数据资料的频数分布尚无定论，多种统计学方法(如泊松分布、二项分布、χ2检验等)均有人用于试验结果的统计分析。该试验的关键步骤是制作良好的骨髓涂片及优质的染色。 结果分析与评价 本试验中只计数PCE中的微核，微核率以千分率 表示。每只动物为一观察单位。每组的雌、雄动 物分别计算微核PCE的均值。雌、雄动物之间无 明显的性别差异时可合并计算结果，否则应分别 进行计算； ? 正常的PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.6～ 1.2)。如比值＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑 制；如比值＜0.05，则表示受试化学毒物的剂量 过大，试验结果不可靠。 * 是从头状链霉菌培养液中分离提取的一种广谱抗肿瘤抗生素，对多种癌症有抗癌作用，其作用原理可使细胞的DNA解聚，同时阻碍DNA的复制，从而抑制肿瘤细胞分裂。本品为细胞周期非特异性药物，其抗肿瘤谱较广，作用迅速，但治疗指数不高，毒性较大。临床适用于消化道癌，如胃癌、肠癌、肝癌及胰腺癌等，疗效较好。对肺癌、乳腺癌、宫颈癌及绒毛膜上皮癌等也有效。还可用于恶性淋巴瘤、癌性胸腹腔积液。 * * 是从头状链霉菌培养液中分离提取的一种广谱抗肿瘤抗生素，对多种癌症有抗癌作用，其作用原理可使细胞的DNA解聚，同时阻碍DNA的复制，从而抑制肿瘤细胞分裂。本品为细胞周期非特异性药物，其抗肿瘤谱较广，作用迅速，但治疗指数不高，毒性较大。临床适用于消化道癌，如胃癌、肠癌、肝癌及胰腺癌等，疗效较好。对肺癌、乳腺癌、宫颈癌