(4)中间培养 中间培养:发生突变尚未表现出来前,有表现延迟的过程,需3代或以上繁殖才能将突变性状表现出来,此过程称为中间培养。 该过程对今后的筛选和获得稳定菌株都是极为重要的。 方法:将变异处理后的细胞放在液体培养基中培养几小时,让细胞的遗传物质复制,繁殖3代以上,以得到纯的变异细胞。 (5)分离和筛选 诱变筛选分两个阶段:初筛和复筛。 初筛:利用鉴别性培养基的原理,有效地把原先肉眼无法观察的生理性状或产量性状转化为“可视化”,将90%菌落淘汰。 复筛:主要根据生产性能进行筛选。 设计简便、高效的科学筛选方案。 初筛 筛选工作 复筛 以量为主(除去对生产无效的菌株) 以质为主(对少量潜力大的菌株的代谢产物量作精确测定) 初 筛 复 筛 对产量突变株生产性能的测定方法 粗测为主 在培养皿平板上 在摇瓶中 较精确的测定 摇瓶培养or台式自控发酵罐培养 在培养皿平板上,通过观察测定某突变菌落周围 淀粉酶变色圈(用碘液使淀粉显色)的大小, 柠檬酸变色圈(可在厚滤纸上培养,用溴甲酚绿作指示剂)的大小, 抗生素抑制圈的大小,指示菌生长圈的大小(测定生长因子产生),纤维素酶对纤维素水解圈(用刚果红染色)的大小,外毒素的沉淀反应圈的大小等, 初筛 在诱变种,营养缺陷型突变株(auxotrophic mutant)在生物学、应用研究以及生产实践上都有极其重要的意义。 1. 营养缺陷型(au
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