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褐球固氮菌 褐球固氮菌 制作人：月落 周口师范学院 褐球固氮菌（拉丁名：Azotobacter chroococcum）为假单胞菌目、假单胞菌科、褐球固氮菌属。主要用于细菌肥料。 褐球固氮菌 培养皿、500mL三角瓶、接种环、电子天平、涂布器、高温蒸汽灭菌锅、超净工作台、摇床、盖玻片、显微镜 使用器材及仪器 细胞较大，球杆状或杆状，2.0～3.0×3.0～6.0微米，常成对或八叠状排列；有荚膜，周生鞭毛，能运动，革兰氏阴性。在无氮培养基上生长良好，菌苔粘稠、糊状，幼培养菌苔透明转乳白色，老培养常呈褐色。 特征特性 甘露醇10g 磷酸二氢钾0.2g 硫酸镁0.2g 氯化钠0.2g 硫酸钙0.2g 碳酸钙5g 琼脂20g 蒸馏水1000mL 阿须贝培养基 褐球固氮菌 分离纯化与鉴定 分离 采样：取适量花园5-10cm深度的土壤用无菌纸包好，带回实验室。 土壤溶液：将取回的土壤 严格按照无菌操作，称量1g土壤加入到10mL无菌水，震荡5min，配成土壤溶液。 接种：用无菌涂布器蘸取土壤悬浮液涂布到培养基，置于28 ℃温箱2-3d。在平板 上会出现粘液状的菌落，选取粘度较大并为褐色的菌落，在阿须贝培养基板上进行划线纯化直到出现单菌落。 染色：用衬托染色法对褐球固氮菌的荚膜进行染色。在载玻片一端滴一滴无菌生理盐水，取少许培养了72h的褐球固氮菌在水中制成悬液，取一滴碳素墨水与菌液混合，另取一载玻片，将其平整的边缘与菌悬液以30°接触，推片使其成为均匀的薄层，风干，在薄层上滴一滴纯甲醇固定1min,加番红染液（番红0.25g,体积分数为95%的乙醇溶液10mL,蒸馏水80mL）数滴于涂片上，冲去甲醇，染色1min，以细流水冲洗，晾干或吹干，置于显微镜下观察。 生物固氮 当做菌肥（多为联合固氮），提高农作物产量，改善品质，提高抗逆性，降低对化学肥料的依赖性 测定固氮酶活性 应用