第四章基因操作的技术原理(电泳)探索.pptVIP

4.1核酸的凝胶电泳 1 定义： 用琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。 琼脂糖凝胶电泳 适用于分离大分子核酸。 聚丙烯酰胺凝胶电泳 普遍用于分离蛋白质及 较小分子质量的核酸 （1） 缓冲液： 常用的几种电泳缓冲液有： TAE[Tris-乙酸和EDTA (pH8.0)] TBE(Tris-硼酸和EDTA) TPE(Tris-磷酸和EDTA) 一般配制成浓缩母液（10X或5X）,储于室温。 TAE、TBE和TPE比较 （4） 电泳条件 在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。 大片断低电压长时间 小片段高电压短时间 （5） 染色和观察： 溴化乙锭（ethidium bromide,EB）染色， 溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其