实验三分光光度法测定蛋白质含量.pptVIP

实验三:分光光度法测定蛋白质含量 一.目的:掌握考马斯亮蓝G－250染色法测定蛋 白质的原理和操作. 二.原理 三.仪器与用具 四.实验试剂 五.实验操作 六 实验报告 二.原理: 考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。 蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。 该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 三.仪器与用具 721分光光度计；10 mL量筒1个；研钵；烧杯；量瓶；移液管：1 mL 3支，0.1 mL 3支；10 mL具塞刻度试管14支。 四.实验试剂 标准蛋白质溶液：用牛血清白蛋白配成含蛋白质100μg／ mL的标准蛋白溶液; 考马斯亮蓝G－250溶液：称取100μg考马斯亮蓝G－250，溶于50 mL 90％乙醇中，加入85％的磷酸100 mL ，最后用蒸馏