实验四利用SDSPAGE分析融合蛋白的可溶性.pptVIP

马玉超 北京林业大学生物科学与技术学院 办公地点：生物楼117；电话 Email:myc0307@ 现代微生物学实验技术 实 验 内 容 ? 染色体步移法克隆已知序列的侧翼序列 ? 转座子随机突变及目的表型的筛选 ? 大肠杆菌β-半乳糖苷酶的诱导 ? 利用SDS分析融合蛋白的可溶性 ? 绿色糖单胞菌的发酵及孢外酶的提取 利用SDS分析融合蛋白的可溶性 牛伯庆 王子元 实验目的 了解利用基因工程技术在大肠杆菌中表达外源蛋白的原理； 掌握SDS的原理、实验操作过程及重要性。 基因的基本结构 ORF：Opening Reading Frame 启动子 终止子 转录区 基 因 RNA起始点 ATG TGA 核糖体结合位点 实验原理 影响基因表达的因素： 启动子： 控制基因表达的第一步，是高表达的关键； 结构基因：密码子偏好性； 表达载体的拷贝数：商业化，pET系列、pGEX系列等。 实验原理 目的基因： 受噬菌体T7强转录、 翻译及终止信号控制； Lac操纵子； T7 RNA聚合酶启动； IPTG诱导； 有His-tag标签； 大肠杆菌BL21， 实验原理 操纵基因 结构基因 调节基因 启动子 阻遏物 ?-半乳糖苷酶 透性酶 乙酰基转移酶 乳糖操纵子 切 接 转 增 筛 表达 实验材料 菌株 pET28a-54/BL21(DE3)，pE