1D-二聚体检测及其临床应用--徐成伟详解.ppt

D-dmier测定及其临床应用 山东大学第二医院检验科 徐成伟 2014-12-20 问题 1、各位所在的检验科开展D-二聚体检测了吗，所用方法、试剂、仪器？ 2、血凝仪D-二聚体试剂敏感性高，对比原来POCT上阳性率增高很多，临床医生不满意，认为特异性低了，如何解释？ 3、D-二聚体测定有POCT、生化、免疫、血凝仪多种实验平台，如何评价？ 4、D-二聚体结果报告单位有DDU和FEU两种形式，报告方式还包括ng/ml、ug/ml、mg/L等形式，是否需要转换？ 5、孕妇D-二聚体结果普遍偏高，是否需建 立单独的正常值范围、cut-off及危急值？ 6、…… D-二聚体的产生及检测应用现状 D-二聚体的测定方法 （1）胶乳凝集法：经典胶乳凝集法是将被检血浆中D-二聚体或FDP与包被在乳胶颗粒上的单克隆抗体发生抗原-抗体反应，产生肉眼可见的凝集反应，进行定性或半定量测定（FDP＞5mg/L、 D-二聚体＞250μg/L）。 该法操作简便、快速、经济，适用于床旁检测，常作为筛查试验用。为定性试验，半定量时费试剂，结果判断有主观差异，敏感性和NPV低于ELISA. （2）自身红细胞凝集法：自身红细胞凝集法采用分别针对D-二聚体和红细胞膜上双表位抗体，当血中D-二聚体水平升高时，抗原-抗体结合的增多而导致红细胞凝集，2min内可以判断结果，为半定量的自身红细胞凝集试验。 其优点是可用全血检测，省去了离心制备血浆的麻烦。缺点是敏感性低和不能定量。 （3）胶体金免疫渗滤反应法：该法是将单克隆抗体吸附在多孔薄膜并粘放在有多层吸收垫的塑料盘上，被检标本加入后即与该抗体结合，然后加入胶体金标记的抗体，形成抗体-抗原-金标抗体复合物在薄膜上即产生紫红色沉淀，紫红色强度与血浆中抗原成比例，在几分钟内即可完成。 该法易受白细胞、血小板、类风湿因子、肝素及血脂等物质的干扰，特异性不强，在不同的报道中其敏感性和阴性预测值（NPV）差别较大，并且厂商和实验室的结果存在较大的差异。 （4）酶联免疫吸附法（ELISA）：ELISA法检测原理是包被在固相载体的抗人D-二聚体或FDP抗体与待测标本中抗原结合，再加入酶标抗体后形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，再加入底物呈显色反应，测得的吸光度值与标本中抗原量成正比。 该法具有灵敏度高、定量准确等特点，但经典ELISA法操作步骤复杂、费时，影响因素较多，不适合急诊使用。 （5）胶乳增强型免疫比浊法：胶乳免疫比浊法是样本中抗原与包被在胶乳颗粒上的单克隆抗体发生抗原-抗体反应，在一定的缓冲体系中产生凝集而导致浊度增大，浊度的变化率与抗原浓度成正比。 目前，已有多种全自动血凝仪用于免疫比浊法D-二聚体和FDP的检测，整个检测过程可以由仪器自动完成，检测效率高，除去准备标本的时间，一般只要5min便可报告准确的定量结果。该法有操作简便、快速、定量准确、敏感度高等优点，可满足急诊需要，在临床研究中应用越来越广泛。但需要专门仪器，成本高。 D-dimer在临床上的应用 D-Dimer Cut-off definition D-D检测的临床应用原则 1、用于排除DVT ，而不是诊断DVT 2、用于排除PTE ，而不是诊断PTE 3、在可疑VTE患者中的其它应用 （1）在无症状的高危患者中筛选DVT/PTE （2）诊断复发VTE 4、在DIC诊断中的意义 5、溶血栓治疗的监测 Wells可疑DVT评分标准 癌症活动期（正在治疗或6月前治疗过，或用姑息治疗） 1 偏瘫，轻瘫或最近下肢石膏固定 1 大型手术或4周内卧床＞3天 1 局部僵硬，沿深部静脉系统分布 1 小腿或大腿水肿 1 与无症状的腿相比，小腿水肿＞3cm（胫骨粗隆10cm下测量） 1 凹陷性水肿（有症状的腿明显） 1 双侧表浅静脉无曲张 1 其他类似DVT的诊断 -2 注：积分累加后＜0，预测可能性低，发病率5%；积分1或2，预测可能性中度，发病率20%； 积分＞2，预测可能性高，发病率66%。 Wells