04第四章植物组织培养技术(三)概述.pptxVIP

第四节 无病毒植株培育 脱毒苗是利用植物组织培养方法，脱除影响植物正常生长的病毒，通过可靠的检测技术验证，然后采用无菌快繁获得的不带特定病毒的苗木 注意 脱毒苗的意义： ①对植物病毒、植物菌原体和类细菌病害提供有效防治技术。 ②恢复种性，提高产量和商品价值。 ③脱毒苗具有一定的抗再度感染能力。 一、植物病毒的分布及危害 （一）病毒在植物体内的分布 病毒侵染植物后是随维管束转移到其他部位 老叶和成熟组织及其器官中病毒含量较高，幼嫩和未成熟的组织及器官中病毒含量较低，而在根尖、茎尖生长点0.1-1mm区域几乎不含病毒。 （二）病毒对植物的危害 1.随着作物栽培时间的推移，发现的病毒种类会越来越多，许多作物被多种病毒侵染。 2. 病毒危害极大，又不能通过化学杀菌剂和抗菌素进行防治和消除 二、植物脱毒方法 （一）热处理脱毒法 （二）茎尖培养脱毒法 （三）茎尖培养与热处理相结合脱毒法 （四）微体嫁接法 （五）愈伤组织脱毒法 （六）花药组织脱毒法 （七）化学方法 （八）低温结合茎尖培养法 （一）热处理脱毒法 热处理脱毒是指在高于正常的温度下，植物组织中的很多病毒可被部分或完全钝化，但是又很少伤害甚至不伤害植株植物组织，达到脱除病毒的目的。 1. 热水处理 2. 热空气处理 3. 变温热处理 （二）茎尖培养脱毒法 茎尖培养脱毒的原理 茎尖分生组织带毒低的主要原因： ①植物体内，病毒容易通过维管系统而移动，但分生组织中不存在维管系统。病毒在细胞间移动的另一个途径是通过胞间连丝，但是移动速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖。 ②在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很高，病毒无法复制。 ③茎尖中存在高水平内源生长素，可以抑制病毒的增殖。 ④倘若在植物体内确实存在着“病毒钝化系统”的话，它在分生组织中应该比在任何其他区域都有更高的活性，因而分生组织不侵染。 2. 茎尖培养脱毒的基本操作步骤 3. 影响茎尖培养脱毒效果的因素 （1）培养基（无机离子、生长调剂物质、状态） （2）外植体大小（小到足以能根除病毒，大到足以能发育成一个完整的植株） （3）光照（光培养的效果通常都比暗培养好） （4）外植体生理状态 （三）茎尖培养与热处理相结合脱毒法 首先采用热处理使病毒钝化，此时，植株茎尖生长速度快于病毒，剥离茎尖组织并进行培养，从而获得彻底脱除病毒的植株。 （四）微体嫁接法 将极小的茎尖作为接穗嫁接到不带病毒的种子实生苗砧木上，然后将砧木、接穗一起到培养基上培养。 （五）愈伤组织脱毒法 植物各种器官和各部位组织经诱导可产生愈伤组织，再分化培养产生芽，最后长成小植株，其中有可能得到无病毒小苗。 （六）花药组织脱毒法 花药或花粉粒培养一般程序是去分化诱导愈伤组织形成，再分化诱导根芽器官的分化形成小植株。由于经过愈伤组织生长阶段，加之形成雄性配子的小孢子母细胞在植株体内属于高度活跃、不断分化生长的细胞，因此，理论上讲其含病毒颗粒很少或几乎没有。 （七）化学方法 化学方法是利用化学药品（如嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素等）处理，抑制植物体内病毒复制。 （八）低温结合茎尖培养法 低温结合茎尖培养法是指通过-80℃低温使病毒钝化，然后使材料复苏后对其茎尖进行培养的一种脱毒方法。 三、脱毒植株检测方法 （一）直接检测法 （二）指示植物检测法 （三）抗血清检测法 （四）分子生物学检测法 （一）直接检测法 直接检测法是直接观察植株茎、叶等器官有无病毒引起的可见症状或者通过显微镜观察病毒的特性来判断植株是否带有病毒。 （二）指示植物检测法 1. 指示植物：病毒学家在研究新的或可疑的病毒，尤其是可以通过汁液传播的病毒时，希望能寻求到一种转株寄主植物，而这种转株寄主能对汁液接种产生迅速和特有的反应，如能在接种叶片上形成局部病斑等，通常将这种转株寄主植物称为指示植物。 2. 指示植物分类： （1）接种后产生系统性症状，其出现的病毒扩展到植物非接种部位，通常没有局部病斑明显 （2）接种后只产生局部病斑，常有坏死、退绿或坏斑构成。 3. 常用指示植物： 千日红、野生马铃薯、光曼陀罗、辣椒、酸浆、心叶烟、黄花烟草、豇豆、莨菪、昆诺阿藜、苋色藜等，病毒寄生范围不同，同一病毒可用一种或几种指示植物进行鉴定。 4. 指示植物检测法分类 （1）汁液感染法 指示植物检测法对依靠汁液传播的病毒，可采用摩擦损伤汁液传播鉴定法 （2）嫁接检测法 对不能依靠汁液传播的病毒，则采用指示植物嫁接法 （三）抗血清检测法 原理：病