[免疫学]实验1概述.ppt

深（副）皮质区 淋巴小结 被膜下淋巴窦 被膜 淋巴结的结构 HE染色 100× 小结帽：小淋巴细胞为主 明区：中淋巴细胞为主 暗区：大淋巴细胞为主 淋巴小结的结构----生发中心 淋巴结髓质的结构 髓索 髓窦 淋巴结深皮质区的高内皮小静脉模式图 3.脾的基本结构 脾脏的基本结构:白髓 脾小体（B细胞区） 中央动脉与动脉周围淋巴鞘 红髓 边缘区（T、B、M?） 脾血窦 脾索（B，浆细胞， M?，DC） 脾脏的基本结构:红髓 试验报告： 1.免疫血清的制备与应用：免疫血清制备的原理、注射步骤。 2.吞噬细胞吞噬功能检测的原理、步骤及镜下观察结果 （红蓝铅笔画图）。 （标注典型结构 瑞氏染色 观察倍数1000×/400× ） 3.绘制免疫器官（脾脏，胸腺，淋巴结）的镜下观察结果 （红蓝铅笔画图）。（标注典型结构 HE染色 观察倍数100×） 值日： 请班干部排好值日生，清理实验桌面，清理显微镜，关掉显微镜开关。 下次实验内容 凝集反应 血型鉴定 沉淀反应 家兔心脏采血 医学免疫学实验报告 班 级 学 号 姓 名 实验室号 带教老师 上课周次 上课时间 实验报告装订成册，以实验室为单位于周一至周五交到21206房间相应位置。 4、8、13、15 第二实验室 周 上/下午 、 、 、 实 验 一 1.免疫血清的制备与应用（一）：家兔皮内注射羊红细胞悬液 2.吞噬细胞吞噬功能检测 3.免疫器官的组织结构观察 分组、组长 课代表联系方式 实验室规则 1．上实验课时，穿好隔离衣。 2．实验室内要保持肃静和秩序，不得谈笑或随处走动，少说、 多做、多想。 3．实验室内禁止饮食和吸烟，关闭通讯工具。 4．用过的实验材料，放于指定地点，不得随意抛置。 5．注意节约实验试剂，爱护实验器材（显微镜、组织切片的使用）。 6．易燃物品（如酒精等）不准接近火源。 7．实验结束后，以小组为单位将实验台整理清洁，值日同学打扫好室内卫生并检查水、电等开关是否关好，离开实验室要关好门窗。 养成良好的习惯 Part I 免疫血清的制备与应用＊（一）：免疫注射 【原理】 将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体，这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。 优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，以及动物的应答能力。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。 抗体（Ab、溶血素） 浆细胞 B细胞 流程： 制备抗原 免疫动物 采血、分离血清 纯化、鉴定 分装、保存 【步骤】 1.备皮：家兔背部剪毛。 2.消毒：碘酒、酒精。 3.抽取0.5～1.0mL绵羊红细胞悬液。 4.针头斜面向上，刺入皮内后平行进针使针头没入，推注0.1ml羊红细胞悬液。5～6点注射。 5.注射器以及消毒棉球弃掉，将家兔放回笼子。 Part II 吞噬细胞吞噬功能检测 【原理】： 机体内的吞噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，受到趋化因子的趋化作用可以到达炎症部位，对细菌等异物进行吞噬和消化。 巨噬细胞：大吞噬细胞（长寿） 中性粒细胞：小吞噬细胞（短寿） 动物：小白鼠。 试验器材：剪刀、镊子、注射器、解剖板、瑞氏染液、载玻片、显微镜等。 抗原：白葡菌菌液。 【材料】 Mouse handling and manual restraint Intraperitoneal injection of mouse 1. 取已注射过淀粉肉汤的小白鼠一只，取白葡菌菌液1ml注入其左下腹腔，轻揉腹部。 2. 30min后，将小白鼠拉颈处死，固定，打开腹腔，用玻片在暴露的肠管上印片，自然晾干。 3. 滴加3滴瑞氏染液于印片上，20秒后加等量蒸馏水，混匀染色3min（一直保持湿润）。自来水冲洗，滤纸吸干。 4. 显微镜下观察。 5. 交回实验器材，最后将小鼠，玻片弃掉。 【步骤】 吞噬有细菌的吞噬细胞 吞噬细胞的百分率＝ 100个吞噬细胞 ×100％ 吞噬指数＝ 100个吞噬细胞中所吞噬的细菌总数 100 2.计算： 1. 巨噬细胞的吞噬现象：油镜下可见大量巨噬细胞，胞浆内数量不等的蓝色细菌。淀粉肉汤已经注射2~3天，游走至肠管外的中性粒细胞因为寿命短多已死亡。 【结果】 1. 小鼠的抓法，拉颈处死手法，不能伤害动物； 2. 右侧腹腔注射易伤及肝脏；开腹时正中皮肤剪开，沿腹白线，避免伤及血管；印片时避免印到肝脏上； 3. 瑞氏染液与蒸馏水等量，染液完全覆盖印迹，并防止干片； 4. 显微镜的使用。 5. 用品放入指定地点，注意个人防护。 【注意事项】 瑞氏染色 10× 40 瑞