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荧光光度法测定核黄素的含量 实验一 一、实验目的 了解荧光法测定核黄素的原理和方法 光谱分析法有哪些？ 学习荧光分光光度计的操作和使用 二、实验原理 核黄素（维生素B2），一种异咯嗪衍生物 VB2在中性或弱碱性的水溶液中为黄色，并具有很强的荧光，但在强酸和强碱中易被破坏 二、实验原理 核黄素的激发光波长范围为440-500 nm，发射光波长范围为510-550 nm 在稀溶液中，核黄素荧光强度与其浓度成正比 样品中加入亚硫酸盐，将荧光素还原成无荧光物质，然后测定样品中残余荧光强度，两者之差即为核黄素所产生的荧光 三、试剂和器材 1.材料 核黄素药片 三、试剂和器材 2.仪器和器材 荧光分光光度计、天平 试管、容量瓶、烧杯、研钵、滤纸、漏斗 四、试剂的配制 核黄素标准液（5 μg /mL） 准确称取核黄素10 mg，加100 mL浓度为1.71 mol/L的醋酸和适量蒸馏水，置于水浴中直至完全溶解。 冷却至室温，用蒸馏水定容至2000 mL，转入棕色瓶中。 五、操作步骤 1.样品液的制备 取样：取核黄素药片一粒，放入研钵中磨成粉； 定容：用蒸馏水洗入容量瓶，定容至100 mL，摇匀，浸提10 min； 过滤：收集部分滤液于试管中； 稀释：取滤液2 mL于棕色容量瓶中，加5 mL 1.74 mol/L HAc，用蒸馏水定容100 mL，待测。 五、操作步骤 2.标准曲线的制作 取10只试管，按下表顺序操作： 五、操作步骤 注意： 在测定中，如果待测样品溶液的荧光强度超出100%，则需要再行稀释，并记录稀释倍数；或者通过调节里灵敏度，最后乘以倍率 亚硫酸钠不能过多，以免影响荧光强度；加入后立即读数，否则核黄素又被氧化成荧光型 六、结果处理 由1-6号管的数据，以核黄素含量（g）为横坐标，F值为纵坐标绘制标准曲线； 求样品管F的平均值F-； 由F-从标准曲线中求得样品管的含量（ μg ）； 计算你所称取药片所含核黄素的含量（mg/片）。 七、思考题 为什么在整个测定过程中需要避光？
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