2014云大分子生物学期末考试研究.doc

云南大学2014年分子生物学复习整理 2.1 表观遗传学是研究在细胞核DNA序列没有改变的情况时，基因功能的可逆的、可遗传的改变。也指生物发育过程中包含的程序的研究。 DNA甲基化（DNA methylation） 基因组印记（genomic imprinting） 母体效应（maternal effects） 基因沉默（gene silencing） RNA editing）等 基因组印记是指来自父方和母方的等位基因在通过精子和卵子传递给子代时发生了修饰，使带有亲代印记的等位基因具有不同的表达特性.imprinting gene 1.DNA的分离，提取 ?材料的选择 物种、组织的选择 ? 组织匀浆 细胞分散、破碎 ? 破碎细胞 SDS表面活性剂 ? 除蛋白 蛋白酶K 酚、氯仿抽提 ? 除RNA RNA酶 LiCl 沉淀 ? DNA回收 乙醇、异丙醇沉淀 ? 电泳 常用琼脂糖凝胶电泳，也用聚丙烯酰胺凝胶电泳，用溴化乙锭（EB）染色，紫外灯下检测。 定义:物理图谱（Physics Map）：物理图谱描绘DNA上可以识别的标记的位置和相互之间的距离(以碱基对的数目为衡量单位)，这些可以识别的标记包括限制性内切酶的酶切位点，基因等。指DNA链的限制性酶切片段的排列顺序,即酶切片段在DNA链上的定位。 遗传图谱genetic map 定义：某一物种的染色体图谱（也就是我们所知的连锁图谱），显示所知的基因和/或遗传标记的相对位置，而不是在每条染色体上特殊的物理位置。 2.2 双螺旋模型 (double helix model)的特点 (1) DNA分子由两条反向平行的多核苷酸链组成， 形成右手双螺旋 (2) 糖一磷酸键是在双螺旋的外侧，碱基对位于内 侧，与轴线垂直，与糖一磷酸骨架近于垂直。 (3) 碱基配对时，必须一个是嘌呤（Purine），另一个是嘧啶（Pyrimidine, single ring） (4) DNA双螺旋有大沟（major or wide groove）和小沟（minor or narrow groove）的存在 碱基配对意义： Ａ－Ｔ　　Ｇ－Ｃ 二级结构的稳定 ； 复制的可靠 性，使遗传信息传递； 基因转录真实性的保证； 反义RNA的调控作用； DNA的三级结构 分子生物学的操作基础（PCR，探针Probe，杂交，RNAi等）。bp, nt, mer 所谓DNA的三级结构，是指在一二结构基础上的多聚核苷酸链上的卷曲。在一定意义上，是指双螺旋基础上的卷曲 三级结构包括链的扭结和超螺旋或者是单链形成的环或是环状DNA中的连环体 2.3 解链温度（melting temperature, Tm）或熔点，Tm是A260的升高达到极大值一半时的温度。即是变性温度范围的中点 1.DNA自身 a)碱基组成 b) DNA的组成（自身均一性/纯度） c) DNA的长度 2. 环境因素： 1）温度 2 ) 化学物质，如有机溶剂，变性剂（如尿素、甲酰 胺等干扰碱基堆砌力和氢键的形成） 酸，碱 ，盐； 高盐利于稳定Tm高，低盐利于变性 DNA保存在TE buffer, 10mM Tris-Hcl, 1mM EDTA, pH8.0 DNA的复性 reassociation 1.定义：单链→双链 复性是一个较慢的过程，变性、复性不断平衡的过程。 (1) DNA自身：片段的大小；浓度；复杂性; (2) 温度。 最佳复性温度一般比Tm低25?C (3) 盐的浓度： 复性时要求盐的浓度达到足够高;DNA浓 度低于 0.4mol/L，单价阳离子增高10倍，Tm增加16.6° 变性剂(尿素、甲酰胺) 分子杂交（molecular hybridization） 两条来源不同的单链核酸（DNA或RNA），只要它们有大致相同的互补碱基顺序，经退火处理即可复性，形成新的杂种双螺