01-异体皮低温储存及临床应用解说.ppt

贾晓明 教授 解放军总医院第一附属医院 解放军总医院烧伤整形医院 异体皮低温储存研究及临床应用 前 言 皮肤的低温储存工作对于临床烧伤患者的救治起着十分重要的作用 对于大面积深度烧伤病人，其治疗是一个漫长而复杂的过程，尤其是临床上皮源的匮乏将严重影响病人的治愈率 皮肤储存的意义 皮肤是人体最大最重要的器官之一，当因大面积烧伤、外伤等原因造成大面积皮肤缺损时，必须行植皮术来覆盖创面，将裸露创面缩小到最小限度 当皮肤缺损超过总体表面积30%时，就没有足够自体皮用来覆盖裸露的创面，此时利用低温储存的异体皮作为创面暂时性覆盖物十分重要 我院皮库简介 自1973年创建皮库以来，分别运用了4℃、 -20℃和-80℃低温冰箱皮肤保存法以及液氮储皮方法 1987年开始速冻玻璃化储皮方法储存的实验研究和临床应用 我院皮库简介 每年异体尸体皮采集及储存40余具 深低温速冻异体皮保存方法的改进使保存皮片活力稳定保持在70%以上，皮片移植成活率达95%以上 成为亚洲最大的皮库之一，已储存了2000余具活力良好的尸体皮，供全国30个省市300多家医院使用 每年创利润数百万元，经济效益显著 我院皮库简介 曾获国家自然科学基金，八五、九五、十五全军科研基金10余项 出版相关专著10余部，发表学术论著100余篇 培养进修生、研究生数百人 获国家科技进步二等奖1项，军队科技进步二等奖5项 第一部分 皮肤低温储存的基础与进展 皮肤储存的基础知识 皮肤低温储存的理论依据 皮肤的低温损伤机制 　 　　皮肤储存方法比较 “两因素”学说 胞内冰晶损伤 胞内生成冰晶，长大到一定程度，引起细胞壁及细胞内超微结构的变化，甚至导致细胞死亡，是降温速率较快时引起损伤的主要原因 溶质性损伤（高渗性损伤） 细胞外水分结冰，导致细胞内外溶液浓度的升高并持续较长的时间。由高渗引起细胞的损伤，是降温速率较慢时引起损伤的主要原因 “两因素”学说 皮肤结构与储存的关系 皮肤不是单细胞成分，而是由表皮和真皮构成的复合组织，由于皮肤内的各种主要细胞成分的结构与功能的复杂性，各种细胞代谢与营养条件不同,对环境改变的适应性亦有所不同。因此皮肤的低温损伤是一个更为非常复杂的过程 低温损伤的干预： 玻璃化储皮方法的发展 抗冻液的使用 玻璃化的基础知识 玻璃化储存的特点 玻璃化储存生物组织和细胞，由于降温速率很快，水分没有足够的时间来形成冰晶，即进入均匀的玻璃状态。这种玻璃态的物理性能与晶体态不同，是一种既可以避免或减轻冷冻过程组织的损伤，又是同时可长期保存组织的良好方法 两种方法的比较 皮肤的玻璃化储存 　皮肤在－196℃的深低温环境中，其组织和细胞内各种酶的活力及代谢很低甚至近乎零，即所谓的“生命悬持状态 ”。在此温度下保存的皮肤理论上可无限期储存。 　玻璃化的理想条件 　理论上说，体积很小的1微升纯水要用106-107℃/s降温速率才能形成玻璃态 　 皮肤玻璃化储存的途径 　　以水为主要成分的生物组织,实现完全玻璃化需要极高的降温速率。目前只能采用各种方法实现部分玻璃化，抑制冰晶形成和长大，避免细胞严重损伤 皮肤玻璃化储存的途径 冷源问题 　目前国内各家皮库主要采用液氮作为冷源，温度可达-196℃，皮片直接放入液氮后，其最快的降温速率可达2160℃/min 皮肤玻璃化储存的途径 储存的皮肤往往因具有一定的厚度和面积带来冷源温度传导困难和储存不便 ，因此可设计成皮卷形式 皮肤玻璃化储存的途径 降温速率 冷却的铜板预冷皮肤后即将其直接浸入液氮 抗冻剂的应用 抗冻液的作用及机制： 深低温储存组织离不开抗冻液的保护，否则皮肤将受到严重的损伤 抗冻剂的作用机制有以下两点： 有效抑制过冷水的不规则形态及促进快速结晶，促进玻璃化行程 缓冲因冰形成而造成的渗透压升高，减轻溶质损害 目前较为成熟抗冻液配方 H液（20%二甲基亚砜、6%丙二醇），以此作为玻璃化储存皮肤的抗冻液 一般情况下，10000cm2面积的皮肤约需抗冻液3000ml 总结：玻璃化储存皮肤的步骤 异体皮的采集 消毒 皮肤的修整 抗冻液的处理 包装 快速降温 液氮容器的管理 玻璃化对皮肤结构和功能的影响 细胞膜的影响 降低细胞的流动性 细胞骨架受损 表皮细胞黏附率降低 基底膜的破坏 玻璃化对皮肤抗原性影响 皮肤经低温储存后，异体皮的存活时间较新鲜异体皮长 低温储存后皮片抗原性降低，可能与皮肤内朗格汉斯细胞（LS）数量降低有关 保存温度越低，抗原性越弱，移植后存活时间越长 低温对朗格汉斯细胞的影响 异体皮匀浆免疫扩散电泳图 异体皮匀浆免疫火箭电泳图 皮肤活力的鉴定