微生物学实验备课笔记发课件.docVIP

实验一 显微镜的使用及微生物大小测定的方法 一、实验目的 1、学习并掌握油镜的原理和使用方法。 2、复习普通光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。 3、学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 4、增强微生物细胞大小的感性认识。 二、基本原理 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，它们由机械装置和光学系统两大部分组成。物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。其中油镜的放大倍数最大，对微生物学最为重要。 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具—测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。其中镜台测微尺并不直接用来测量细胞大小 ，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。目镜测微尺每小格所代表的实际长度因显微镜的不同放大倍数而异，因此用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微格数，即可计算出细胞的实际大小。 三、实验器材及药品 大肠杆菌、金黄葡萄球菌、放线菌、曲霉等微生物染色标本； 香柏油，二甲苯，目镜测微尺，镜台测微尺，显微镜，擦镜纸等。 四、操作步骤与方法 (一)显微镜的使用(参见P17) 1、观察前的准备(略) 2、显微观察 一般地，进行显微观察时应遵守从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序，因为低倍镜视野相对大，易发现目标及确定检查的位置。 1)低倍镜观察 2)高倍镜观察 3)油镜观察 (二)微生物大小的测定 1、装目镜测微尺(由教师操作并演示) 2、校正目镜测微尺 1)放镜台测微尺 将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。 2)校正 先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微的刻度后，转动目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。 用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和油镜下，两重合线之间两尺分别所占的格数。 3)计算 根据下列公式可计算出在不同放大倍数下，目镜测微尺每格所代表的长度 两重合线间镜台测微尺格数×10 目镜测微尺每格长度= 两重合线间目镜测微尺格数 3、菌体大小测定 取下镜台测微尺，换上细菌染色制片，先用低倍镜和高倍镜找到标本后，换油镜测定金黄葡萄球菌的直径和大肠杆菌的宽度和长度各占目镜测微尺的格数，最后再乘上该放大倍数下目镜测微尺每格所代表的长度，即为该菌的实际大小。 4、测量完毕 取出目镜测微尺后，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦拭干净，放回盒内保存。 五、原始数据记录与数据处理 1、原始数据记录：包括微生物形态观察和微生物个体的大小测定两部分。 每位同学观察3种微生物染色标本，其中大肠杆菌和金黄葡萄球菌染色标本必看，其它一种在青霉、曲霉、放线菌和酵母菌中任意选择。 每位同学均测定大肠杆菌和金黄葡萄球菌2种染色标本中的微生物个体大小。 记录你所选择的哪3种微生物染色标本进行形态观察的和大小测定的。 2、数据处理： 1) 形态观察：要按从搜物镜→低倍镜→高倍镜→油镜的顺序画图描述(注意比例)观察到的微生物群体或个体形态。 2) 大小测定： A、将目镜测微尺校正结果埴入下表 接物镜 接物镜倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格代表的长度/um 低倍镜 高倍镜 油镜 10× 40× 100× 接目镜放大倍数： B、将各菌测定结果填入下表(单位：/μm) 微生物名称 目镜测微尺每格代表的长度/um 宽 长 菌体大小范围/um 目镜测微尺格数 宽度/um 目镜测微尺格数 长度/um 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 六、思考题 1、用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？ 2、影响显微镜分辨率的因素有哪些？ 3、为什么要换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？ 4、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一微生物的大小时，其测定的结果是否相同？为什么？ 实验二　显微镜直接计数法 一、目的要求 1、明确血细胞计数的原理。 2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌