小麦突变体的获得和图位克隆汇编.pptVIP

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2016-08-10 发布于湖北
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小麦突变体的获得和图位克隆汇编.ppt

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小麦突变体的获得和图位克隆抗性基因报告人：刘昌来小麦突变体的获得 0.1%-1%浓度的EMS室温下浸泡种子8-20小时，洗5小时，田间种植，接种赤霉菌筛选感病植株构建近等基因系近等基因系（Near Isogenic Lines,NIL)是NIL)是指一组遗传背景相同或相近，而某个特定性状或其遗传基础有差异的一组品系。注：突变型和野生型组成一个近等基因系确定两端分子标记根据已发表的小麦EST和SSR序列，设计引物，扩增纯合突变体和野生型基因以及F2组DNA，通过MapMaker软件确定与突变基因连锁的SSR标签；对F2代进行RFLP，通过已知的小麦SSR数据库，将突变位点定位在染色体上构建基因组文库线性化BAC载体并使用磷酸酯酶处理，对基因组DNA进行酶切，琼脂糖电泳分离大小片段，选择大片段链接入线性化的BAC载体上，电击转入大肠杆菌宿主细胞，在含氯霉素、IPTG和X-gal琼脂平板上筛选转化株。将携带重组BAC的白色菌落再次转移到另一含有同样附加惩罚的平板上培养以进一步确定颜色筛选，重新挑取白色菌落并在微量滴定板的孔中进行阵列排布。染色体步移通过整合已有的遗传图谱和寻找新的分子标记，提高目的基因区域遗传图谱和物理图谱的密度；使用筛选cDNA文库、外显子扑捉和cDNA直选法等找到阳性克隆中的候选基因，再进行分离、时空表达特点、同源性比较等分析确定目的基因。 * ♀突变体（感病） ♂野生型（抗病） × 亲本正交 F1代感病性抗病性抗病:感病=1:1 突变显性突变隐性突变显性正反交结果相同由核基因控制，否则细胞质遗传 ♀F1代 ♂F1代 × F2代感病:抗病=3:1 感病:抗病≠3:1 单基因控制非单基因控制 *