MS培养基母液的配制与保存.docVIP

MS培养基母液的配制与保存 一、目的要求 1、通过MS培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能； 2、掌握培养基各种母液的保存方法。 二、仪器与用具 1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱； 2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签； 3、试剂：95%酒精，0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。 三、方法步骤 （一）母液的配制 母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。 优点：（1）保证各物质成分的准确性； （2）便于配置时快速移取； （3）便于低温保藏。 1、MS大量元素母液（10×） 称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。 化学药品 1升量 10升量（10×） 50升量（50×） ① NH4NO3 1650 mg 16.5g ② KNO3 1900 mg 19.0g ③ CaCl2·2H2O （CaCl2） 440 mg （ ） 4.4g ④ MgSO4·7H2O（MgSO4） 370 mg （ ） 3.7g ⑤ KH2PO4 170 mg 1.7g 2、MS微量元素母液（100×） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 化学药品 1升量 10升量 100升量（100×） ① MnSO4·4H2O （ MnSO4·H2O） 22.3mg （21.4 mg） 223mg （214 mg） ② ZnSO4·7H2O 8.6 mg 86mg ③ H3BO3 6.2 mg 62 mg ④ KI 0.83 mg 8.3 mg ⑤ Na2MoO4·2H2O 0.25 mg 2.5mg ⑥ CuSO4·5H2O 0.025 mg 0.25mg ⑦ CoCl2·6H2O 0.025mg 0.25mg 注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0.25 mg×10 2.5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0.25 mg的量。 3、MS铁盐母液（100×） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 化学药品 1升量 10升量 100升量（100×） Na2·EDTA 37.3 mg 373 mg FeSO4·7H2O 27.8 mg 278 mg 注意配制时，两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。 4、MS有机物母液（100×） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 化学药品 1升量 10升量 100升量（100×） ① 烟酸 0.5 mg 5mg ② 盐酸吡哆素（VB6） 0.5 mg 5mg ③ 盐酸硫胺素（VB1） 0.1 mg 1 mg ④ 肌醇 100 mg 1 g ⑤ 甘氨酸 2 mg 20mg 5、生长调节剂 单独配制，浓度为1—5 mg/ml（书中为0.5 — 1 mg/ml），本实验要求配成1 mg/ml 。 配制培养基母液时注意事项： ①一些离子易发生沉淀，可先少量水溶解，在按配方顺序依次混合； ②配制母液时用蒸馏水或重蒸馏水； ③药品应用化学纯或分析纯； ④溶解生长素时，可用少量0.1—1 N的NaOH 或95%酒精溶解，溶解分裂素类用0.1—1 N的HCl加热溶解（如再加蒸馏水，易产生白色沉淀，此时可加入热水）。 （二）母液的保存 1、装瓶：将配制好的母液分别装入试剂瓶中，贴好标签，注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期、配制者。（注意将易分解、氧化者，放入棕色瓶中）例如：MS铁盐（100×），2013.10.22,12生技班甲组 2、贮藏：4℃冰箱。