鲜乳中抗生素残留检测绪论.pptVIP

鲜乳中抗生素残留检测 抗生素是治疗动物疾病的常用药物，并作为饲料成分被广泛使用。但抗生素容易在动物体内及其产品中残留，经过食用后进入人体，给人类的健康造成危害。目前人们对牛奶的消费量越来越大，牛奶中残留的抗生素会对饮用者的身体健康造成危害，也会对牛奶发酵过程的发酵剂产生抑制作用，从而使牛奶变质造成经济损失。牛奶中抗生素残留的问题日益受到社会的重视。 目前牛奶中抗生素残留的检测方法有很多，比较常用的是微生物法，如纸片法﹑TTC法等。此外还有其他理化方法，主要包括:高效液相色谱法、色谱/质谱连用法、免疫法等等。 氯化三苯四氮唑（TTC）试验是用来测定乳中有无抗生素残留的一种比较简易的方法. TTC检测方法 1.原理 细菌生物氧化有三种方式，即加氧、脱氢和脱电子。当样品中加入嗜热链球菌后，如果样品中没有抗生素残留，嗜热链球菌就生长繁殖，在新陈代谢过程中进行生物氧化，其中脱出的氢可以和加在样品中的氧化型TTC结合而成为还原型TTC，氧化型TTC是无色的，还原型TTC是红色的，所以可以使样品变红色。相反，如果样品中存在抗生素，嗜热链球菌就不能生长繁殖，没有氢释放，氧化型TTC也不被还原仍为无色，样品也不变色。 2.设备与材料 水浴锅 恒温培养箱 ?温度计 试管架? 灭菌10mL吸管? 灭菌1mL吸管? 灭菌15×150mm试管 ?杀菌锅 3.培养基和试剂 ?菌种：嗜热链球菌 ?脱脂乳：脱脂奶粉按10%含量（W/V）加蒸馏水调制，经113℃20min灭菌。 4%氯化三苯四氮唑水溶液：无菌称取1g?TTC溶解于25mL灭菌蒸馏水中，装褐色瓶于4~10℃冰箱储藏，如超过一日变成玉色或淡褐色均废弃。也可先配制成20%溶液储藏，临用前取适量以灭菌蒸馏水5倍稀释（V/V）。TTC遇光会自动变色，故避光储藏。 ?抗生素、酸奶（新鲜）、奶样 注：嗜热链球菌的筛选方法 （1）培养 培养基配方：酵母膏7.5g?、蛋白胨7.5g、葡萄糖10g?、KH2PO4?2g、西红柿汁100mL?、吐温80?0.5mL、?蒸馏水900mL?pH 7.0? ★?西红柿汁的制作方法： 将新鲜番茄洗净，去皮切碎（切勿捣碎），放入锥形瓶，置4℃冰箱8~12h，取出后用纱布过滤。如一次使用不完，可将其置入0℃冰箱，可保存四个月。使用时让其在常温下自然溶解。 制法：将上述各成分加热溶解，校正pH，分装于灭菌锥形瓶中，在115℃下高压灭菌20min。取适量酸奶（3~5mL）接种于培养基，进行培养分离。 （2）染色镜检 染色镜检，嗜热链球菌的细胞呈卵圆形，成对或形成长链。 ?4.检测程序 4.1.菌液制备：将经培养分离后得到的嗜热链球菌移至10%的灭菌脱脂乳中，36±1℃、15h培养后，以10%的灭菌脱脂乳1：1稀释待用。 4.2.?取检样9mL，置15×150mm试管，80℃水浴加热5min，冷却至37℃以下，加菌液1mL，36±1℃水浴培养?2h，加4%的TTC 0.3mL，36±1℃水浴培养30min，观察如为阳性，再水浴培养30 min做第二次观察。每份检样做二份，另外再做阴性、阳性对照各一份，阳性对照管用10%的灭菌脱脂乳?8mL加抗生素1mL及菌液和?TTC。阴性对照管用10%的灭菌脱脂乳9mL加菌液和?TTC。 5.?判断方法 准确培养30min，观察结果，如为阳性，再继续培养30min做第二次观察。在观察时要迅速，避免光照过久干扰，乳中有抗生素存在，则在向检样中加入菌液培养时细菌不增殖，此时由于加入的指示剂TTC不还原，所以不显色。与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即进行增殖，TTC被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色时为阳性，成红色为阴性。 显色状态 判断 未显色者? 可疑 微红色者? 可疑? 桃红色→红色? 阴性? 6.显色状态判断 最低检出量 抗生素名称 0.004单位 青霉素 5单位? 卡那霉素 0.4单位  庆大霉素 0.5单位??  链雹素?? 检测各种抗生素的灵敏度 抗生素检测流程图 鲜乳中抗生素残留检测