定量PCR操作流程.pptVIP

快速导入模板方法 快速导入模板功能 如何观察结果 * 双击该图标，打开软件 出现此界面，确认 选择为第一个（ Quantitative PCR）， 点击OK 此处3个按钮，自左向右 依次为设置、运行、分析 选中实验中所用的孔，与仪器上相对应 随后在Well type的下拉选框里选择相应 的Unknown（待测样本）、NTC（阴性 对照）、Standard（标准品）。理论上 试剂盒带4个浓度的标准品，每次实验 使用。阴性对照设置1个。 选中Unknown孔，随后在Collect Fluorescence data 下面的FAM打上勾。对Standard、NTC做同样的操作 接下来，对标准品进行赋值。目前显示未 赋值的情况，可以看见每一个Standard显 示均为 0 选中其中一个Standard（标准品）孔，在 Standard quantity右侧的方框里填入相应的 值。比如，试剂盒 提供的第一个标准品浓度 为50000，就在方框内填入。此时面板上的 孔里也显示相应的值。 依次对剩下的3个标准品进行赋值，如图 所示，4个标准品孔分别代表50000-的4个浓度。 点击此标签，进入程序 设置界面。 可根据试剂盒的说明进行 设置。一般，有UNG酶 启动和预变性两步。如 图示最左方50度表示UNG 酶消化 ，95度表述预变性 每个步骤的 温度显示在 横线下方， 上方为时间 如果试剂盒说明为2步法扩 增，则表示95度和60度两个 温度，选择Normal 2 Step。 如果为3步法 扩增，则表示 95度、55度和72度三个温度 选择Normal 3 Step。 当板、程序全部设置 完全后，点击Run进 入 运行界面。点击Start 点击Start会弹出此保存对话框 选择合适的路径，保存实验结 果，并开始实验。实验结束后 无需再次保存。 假如 已有实验结果，日后进行 同类实验时可直接使用Import （模板导入）功能。点击Import 弹出此对话框，找到作为模板的 文件，打开即可导入板设置。 导入程序设置方法： 选择Custom，点击 Import，按前述 方法 导入模板的程序设置 在Analysis结果分析 界面下，选择扩增曲 线Amplification plots 观察扩增曲线 *