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艾滋病常用实验室检测及临床意义分析 广西疾病预防控制中心 梁富雄 2013.4 主要内容 HIV抗体检测 CD4检测 病毒载量检测 实验室安全防护 感染艾滋病毒后的自然发展过程 艾滋病感染者 艾滋病患者 窗口期 1 2 3 4 急性感染期 KINETICS OF VIRAL MARKERS DURING PRIMARY HIV-1 INFECTION HIV RNA HIV p24 antigen HIV antibodies HIV感染后血液中核酸、抗原和抗体动态变化 窗口期 暴露 天数 检测域 感染HIV后病毒载量、CD4与病程变化规律 艾滋病实验室分类 筛查实验室（CD4检测实验室） 确证实验室（CD4、病毒载量实验室…) 中国HIV实验室网络 国家艾滋病参比实验室 中国CDC性艾中心 艾滋病确认中心实验室 省、市 艾滋病确认实验室 省、市 艾滋病筛查中心实验室 省、市、州、县 艾滋病筛查实验室 省、市、州、县 艾滋病检测点 乡、镇 HIV实验室条件 人员:经过专门技术培训,取得培训合格证/上岗证; 环境:功能分区,符合生物安全二级要求; 仪器设备:按要求配备，满足检测要求。 实验室必须经过资质认证/验收！ HIV病原体诊断 HIV抗体检测 艾滋病病毒抗原检测（P24） HIV核酸检测 病毒分离 检测样品 血清、血浆 尿液 抗凝全血（CBC、CD4、VL…) PBMC（外周血淋巴细胞） 样品的采集和处理 一、样品的采集 最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血(抗凝血)。 唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用样品的采集方法如下： （一）采集样品应按临床采血技术规范及检测试剂盒要求进行。 （二）采集标本时应注意安全，操作应戴双层手套。建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。 （三）血清样品采集：用注射器抽静脉血3－5ml，室温放置1-2小时，待血液凝固或用3000rpm离心15分钟，吸出血清备用。 （四）抗凝血样品采集(免疫功能CD4/CD8测定、血液常规CBC测定、病毒载量）：用加有抗凝剂（K3EDTA）的真空采血管或试管抽取静脉血，反复轻摇，常温6小时以内送达实验室检测CD4/CD8或CBC后，再分离血浆和血细胞备用。 （五）血清或血浆样品应存放于-20℃， 短期内（1周）进行检测的样品可存放于2-8℃。 （六）用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒 RNA检测的样品如长期（3个月以上）保存应置于-80℃。 二、样品的运送 （一）抗体检测实验室间传递的样品应为血清或血浆，血液常规、CD4和病毒载量等要求送抗凝血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。 （二）将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。如果路程较远或气候炎热，应在2-8℃条件下运送。抗凝血和抗体检测样品路程短可常温送检。包装内需附有送检单。 （三）特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须将盛样品的试管包扎好，保证不会破碎和溢漏。 三、样品的接收 （一）含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 （二）核对标本与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。 （三）检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。 （四）因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试。 HIV抗体检测的目的 诊断 确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。 血液筛查 防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 监测 了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。 HIV抗体检测的方法 筛查试验（包括初筛和复检）：酶联免疫吸附试验（ELISA)、化学发光试验、明胶颗粒凝聚试验（PA）、免疫渗滤试验、免疫层析试验等 确证试验：免疫印迹试验（WB)、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验、免疫荧光试验等。 艾滋病抗体确证试验 免疫印迹法（WB）为目前最常用的HIV抗体确认方法，被公认为判断HIV感染的黄金方法