基础生物化学-核酸合成介绍.ppt

12 核酸的合成 12.1 DNA的生物合成 12.2 RNA的生物合成 12.3 核酸合成抑制剂 12.4 基因工程简介 DNA是生物界遗传的主要物质基础。生物有机体的遗传特征以密码的形式编码在DNA分子上，表现为特定的核苷酸排列顺序——即遗传信息。 在细胞分裂前通过DNA的复制，将遗传信息由亲代传递给子代，在后代的个体发育过程中，遗传信息自DNA转录给RNA，并指导蛋白质合成，以执行各种生命功能，使后代表现出与亲代相似的遗传性状。 80年代以后在某些致癌RNA病毒中发现遗传信息也可存在于RNA分子中，由RNA通过逆转录的方式将遗传信息传递给DNA。 遗传信息的传递方向即生物界遗传信息传递的中心法则。 12.1 DNA的生物合成 12.1.1 DNA的复制 为了保证遗传的稳定性，在每次细胞分裂之前，遗传信息载体必须精确地复制自己。 遗传信息的载体是DNA，但许多病毒的遗传信息载体是RNA而不是DNA。 12.1.1.1 DNA复制的半保留性 DNA复制（replication）：在亲代双链DNA分子的每一条链上按碱基互补配对而准确地合成一条新的互补链，结果生成两个与亲代链相同的DNA双链的过程。 ①半保留复制(semi conservation replication) 由于每个子代DNA的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的。这种复制方式称为半保留复制。 ②半保留复制的证据 1958年Meselson和Stahl的实验首次支持了半保留复制方式。 将大肠杆菌放在15NH4C1培养基中生长15代，使DNA被15N标记后，再将细菌移到只含有14NH4C1的培养基中培养。 在不同的时间取出样品裂解细胞后，将裂解液进行密度梯度离心。 离心后从管底到管口。DNA分子就停留在与其相当的CsC1密度处，在紫外光下可以看到形成的区带。 14N-DNA分子密度较轻(1.7g/cm3)，停留在离管口这较近的位置；15N-DNA密度较大停留在较低的位置上。 当含有15N-DNA的细胞在14NH4C1培养液中培养一代后，只有一条区带介于14N-DNA与15N-DNA之间，表明DNA一条链来自15N-DNA，另一条链为含有14N的新合成链。 培养两代后则在14N-DNA区又出现一条带。 按照半保留复制方式培养两代，只能出现14N-15NDNA两种分子，随着代数的增加14N-DNA逐渐增加。而14N-15NDNA区带逐渐减弱。 Meselson和Stahl的实验证实了保留复制的设想。 ③DNA的半不连续复制 DNA复制是半保留复制，并且是半不连续复制(Semi-ondisctinuous replication)。 DNA双螺旋的两条链是反向平行的，因此，在复制起点处两条DNA链解开成单链时，一条是5‘→3’方向，另一条是3‘→5’方向。 以这两条链为模板时，新生链延伸方向一条为3‘→5’，另一条为5‘→3’。但生物细胞内所有催化DNA聚合酶都只能催化5‘→3’延伸。 在复制起点两条链解开形成复制泡(replication bubbles)，DNA向两侧复制形成两个复制叉(replication forks)。 以复制叉移动的方向为基准，一条模板链是3→5，以此为模板的新生DNA链合成沿5→3方向连续进行，这条链称前导链(leading strand)。 另一条模板链的方向为5‘→’3‘，以此为模板的DNA合成也是沿5’→3‘方向进行，但与复制叉前进方向相反，且是分段、不连续合成的，这条链称滞后链(lagging strand)，合成的片段为冈崎片段(Okaxaki fragments) 。 这些冈崎片段以后由DNA连接酶连成完整的DNA链。 前导链的连续复制和滞后链的不连续复制，称为DNA合成的半不连续复制。 12.1.1.2 DNA的复制酶和相关蛋白 DNA复制就是DNA指导的DNA合成代谢，需要有DNA作为复制的模板。 三磷酸核苷酸(dNTP)是合成原料。 有模板和合成原料后，细胞内还有许多酶和蛋白质参与DNA的复制。 ⑴DNA聚合酶(DNA Polymerases) DNA聚合酶的性质 ①以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为前体催化合成DNA； ②需要模板和引物的存在； ③不能起始合成新的DNA链； ④催化dNTP加到生长中DNA链的3‘-OH末端； ⑤催化DNA合成的方向是5→3。 ①大肠杆菌DNA polymerase (polⅠ) 1956年Kornberg首先发现了DNA聚合酶，又称Kornberg酶。 DNA polⅠ由一条多肽链组成，约含1000个氨基酸残基，MW为109KD。 每个大肠杆菌细胞中含有约400个分子，每个分子37℃下能催化667bt/min掺入正在生长的DNA链。 经过枯草杆菌蛋白酶处理后，酶分子分裂成两个片