免疫学实验-血清学反应探索.ppt

吞噬细胞 小吞噬细胞：中性粒细胞 大大吞噬细胞：单核细胞、巨噬细胞 * * * 鸡红细胞 大吞噬细胞 巨噬细胞对颗粒性抗原有强大的吞噬能力。常用细胞型抗原如鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等与巨噬细胞孵育， 对鸡红细胞消化程度分级： Ⅰ级：未消化，鸡红细胞核清晰，着色正常。 Ⅱ级：轻度消化，鸡红细胞核模糊，核肿胀，着色淡。 Ⅲ级：完全消化，鸡红细胞核溶解，染色极淡。 葡萄球菌 中性粒细胞 血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞。在机体固有免疫和适应性免疫中发挥重要的作用。对中性粒细胞的检测包括运动功能、吞噬功能和杀伤功能的测定。对于感染等疾病有重要的辅助诊断意义。 免疫实习到此结束，  * * * 温度升高，分子运动快，碰撞接触机会多，结合速度快。 抗体球蛋白因等电点高，只带有微弱的负电荷，而且分子又较大，因此电泳力小，小于电渗力，而一般抗原蛋白质常带较强的负电荷，分子较小，电泳力大，大于电渗力，泳向正极，电泳时抗原放负极侧，抗体放正极侧，抗原抗体相对泳动，一定时间后抗原和抗体将在两孔之间相遇，在比例适当处形成肉眼可见的沉淀线。 * 前面所讲述的凝集反应、沉淀反应以及补体结合反应均属于经典抗原抗体反应的范畴，这些反应的原理非常简单，就是抗原抗体的特异性结合，反应结果可以通过肉眼来直接观察凝集团块、沉淀线或者溶血现象。然而，这些经典方法的缺点是对于所检测抗原抗体的浓度要求比较高，敏感性较低，当抗原抗体量较低时，很难出现肉眼可见的上述现象。此外，用肉眼观察结果具有一定的主观性，不同的观测者可能判定的结果不一致，比如试管凝集反应凝集程度的判定。 因此，需要一种辅助性手段来提高抗原抗体反应的敏感度和标准化，免疫标记技术的发明解决了这一问题。 * 酶联免疫吸附试验属于免疫酶技术的一种 根据标记对象和检测对象的不同，可以分为多种类型，以其中一种来介绍这种方法的基本原理i： 首先以已知抗原包被酶标板，吸附一定时间后，洗涤未结合的可溶性抗原成分。 在吸附有抗原的酶标板中，加入待测血清，孵育一定时间，使待测血清中的特异性抗体与包被抗原充分反应、结合，之后充分洗涤未与抗原结合的游离抗体成分。 在吸附有抗原抗体复合物的酶标板中，加入针对待测抗体来源种属的酶标二抗（即若待测血清来自人，那么应加入抗人的二抗。免疫球蛋白的免疫原性可以分为同种型、同种异型和独特型，其中同种型抗原决定簇存在于CH和CL区，因此，以某一种属的IgG免疫另一种属，可以获得针对该种属所有IgG的特异性结合的抗体，由于是针对抗体的抗体，将其称之为二抗。在这个试验当中，正是利用二抗的这一特点，用于最后的酶反应显色，因为这样就可以同一种属的同一类抗体制备一个酶标二抗，这一二抗可以用于来自该种属所有同类抗体的检测。 酶标二抗吸附一定时间后，充分洗涤，去除未结合成分。 加入标记酶的相应底物，孵育一定时间后显色。 * 用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性相结合，使检测的灵敏性达pg水平。常用于标记的放射性核素有125I和131I。其基本原理是用放射性核素标记的已知抗原（Ag*）与待测的同种抗原（Ag）共同竞争有限数量抗体（Ab），若待测Ag含量愈多，则形成的可溶性Ag?Ab复合物愈多，形成的Ag*?Ab复合物（B）愈少，而游离Ag*（F）愈多。反之若样品中Ag甚少，则大量Ag*存在于复合物中，用适当的方法分离免疫复合物，分别测定复合物中的Ag*和游离Ag*的放射性，从标准曲线上可以查知待测Ag的含量。放射免疫测定法灵敏度达pg水平，特异性强，常用于微量物质测定。 * 是用荧光色素对抗体或抗原进行标记，再与相应抗原或抗体结合，然后在荧光显微镜下观察抗原抗体复合物散发荧光的有无、强弱、部位等以分析示踪相应的抗原或抗体，借此对标本中的抗原（或抗体）作出定性、定量、定位检测。 。 常用的荧光色素有异硫氰酸荧光素（FITC），此外还有四乙基罗丹明（RB200）、四甲基异硫氰酸罗丹明（TMRITC）和三氯三嗪基氨基荧光素（DTAF）等 。 * （++++）表示血球100% 凝集，红细胞形成片层凝集，均匀布满管底或边缘皱缩如花环状；（+++）表示血球75% 凝集，红细胞形成片层凝集，面积略多于（++）；（++）表示血球50% 凝集，红细胞形成片层凝集，面积较小，边缘较松散；（+）表示血球25%凝集，红细胞沉于管底，周围有散在的少量凝集。 * * * 溶血反应 RBC + RBC抗体 (溶血素) 新鲜血清（补体） 溶血 由抗原抗体复合物结合C1q启动的途径 1. 激活剂 Ag-Ab