专题53血红蛋白的提取和分离探析.ppt

一、基础知识： 1. 凝胶色谱 法的原理 2.缓冲液 3.电泳 二、实验操作——蛋白质的提取和分离 样品处理、粗分离、 纯化、纯度鉴定 样品处理 粗分离 纯化 （凝胶色谱操作） 纯度鉴定 1.洗涤红细胞时，为何次数不能过少？ 答：无法除去血浆代白。 2.洗涤红细胞时，为何离心速度不能过高，时间不能过长？ 答：会使白细胞等一同沉淀。 3.用沸水浴加热，是干燥的凝胶颗粒在洗涤液中膨胀有什么好处？ 答：节约时间；除去颗粒中可能有的微生物；排除空气。 4.向色谱柱中装填凝胶颗粒时，为何要紧密，不能有气泡？ 答：降低颗粒之间的空隙；气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗涤次序，降低分离效果。 5.凝胶色谱操作中，如果洗脱液流干，露出凝胶颗粒，怎么办？ 答：重新装填。 6.如何判断色谱柱制作成功？ 答：如果在洗脱液中，红色区带均匀一致地移动，说明成功。 7.你能描述血红蛋白分离的完整的过程吗？ 答：（1）通过洗涤红细胞，血红蛋白释放，离心等收集血红蛋白，即样品的处理。 （2）经透析去除分子量较小的杂质，即样品粗分离。 （3）通过凝胶色谱法，去除分子较大的杂质蛋白，即样品的纯化。 （4）经聚丙烯酰胺凝胶电泳，进行纯度鉴定。 8.血红蛋白有什么特点？对蛋