细胞工程实验教程（吴杰）.doc

细胞工程实验教程 前 言 细胞工程(Cell engineering)是指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传特性，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。 21世纪合成生物学的发展，采用计算机辅助设计、DNA或基因合成技术，人工设计细胞的信号传导与基因表达调控网络，乃至整个基因组与细胞的人工设计与合成，从而刷新了基因工程与细胞工程技术，并将带来生物计算机、细胞制药厂、生物炼制石油等技术与产业革命。 前言 第一篇 细胞工程实验基础知识 实验室安全守则 5 细胞工程基本实验操作 8 第二篇 植物细胞工程实验 实验一 培养基母液的制备 14 实验二 培养基的配制与灭菌 19 实验三 培养材料灭菌和接种 24 实验四 愈伤组织的诱导与分化 28 实验五 植物细胞悬浮培养与同步化 31 实验六 原生质体培养 33 实验七 烟草叶片组织培养 35 实验八 马铃薯茎尖脱毒 37 实验九 烟草遗传转化实验 39 第三篇 动物细胞工程实验 实验十 细胞原代培养 42 实验十一 细胞传代培养 44 实验十二 细胞的冻存和复苏 45 实验十三 细胞的分裂指数 47 实验十四 细胞周期的测定 49 第四篇 综合实验设计 实验花药培养及花粉发育时期的鉴定 52 实验十六 分离培养大鼠腹腔巨噬细胞实验 55 附录： 56  第一篇 细胞工程实验基础知识 实验室安全守则 一般规定 1、上课第一天请先熟悉环境，察看紧急冲洗站、洗眼站、灭火器、急救箱及安全梯等的位置，牢记“安全”是进行任何实验最重要的准则。 2、在实验室內请穿着实验服，避免穿凉鞋、拖鞋。留有长发者，戴帽套将头发捲入套內，或以橡皮筋束于后，以防止引火危险或污染实验。 3、在实验室内禁止吸烟、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服及杂物等。 4、所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得带出实验室。每组分配的仪器、耗材请确定清点与保管，课程结束后如数清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用，实验前后，请把工作区域清理擦拭，并随时保持环境卫生。 5、实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作规程，注意上课所告知的注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，确切记下自己的结果，严禁抄袭，确定关闭不用的电源、水、酒精灯及煤气等。 6、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验室过夜。 7、实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及电源，离开实验室前记得洗手。 8、任何意外事件应立即报告师长，并应熟知相关的应急措施。 药品 1、使用任何药品，请先看清楚标示、注意事项，翻阅物质安全资料表，查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2、新配制的试剂请清楚注明内溶物、浓度、注意事事项及配制日期，为避免污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3、挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、(-mercaptoethanol、酚等）要在通风橱中戴手套量取配制，取用完后随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4、有毒、致癌药剂例如acrylamide（神经毒）、ethidium bromide（突变剂）、SDS、秋水仙素请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，应养成洗手的好习惯。 5、接触到病原材料或细菌，应迅速消毒。所有被污染的物品，在丢弃或重复使用前均需先灭菌，固体培养基不得倒入水槽或下水道中。 6、使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或安全吸球。 仪器 1、使用仪器前先了解其性能、配置及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸，勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2、使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，锁紧离心机转陀。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3、实验时不要用潮湿有汗的手去操作电器，不要用手紧握可能荷电的电器，不应以两手同时触及电器，电器设备外壳