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人胚胎干细胞human embryonic stem cell 南京医科大学组织胚胎学系 周作民 干细胞的基本概念 二、人胚胎干细胞的特性 永生化(immortal)； 有稳定的发育潜能，能被诱导增殖或分化； 能维持稳定的二倍体染色体结构； 具有全能性； 三、人胚胎干细胞建系 NIH对现存人体胚胎干细胞系进行登记，认定世界上有64个人体胚胎干细胞系符合联邦政府资助的标准。 64个人体胚胎干细胞系分布在6个国家的10个机构中：瑞典24个，美国20个，印度10个，澳大利亚6个，以色列4个。 NIH试图用这些人体胚胎干细胞系完成有关人体胚胎干细胞的基础研究工作。 1999年12月，美国《科学》杂志公布了当年世界科学进展的评定结果，干细胞的研究成果列在举世瞩目耗资巨大的人类基因组工程之前，名列十大科学进展首位。 七、ES细胞研究的趋势 积极寻找胚胎干细胞的来源 改善ES细胞的体外培养条件，建立更有效更简便的获得ES细胞的方法。 定向诱导分化成特定类型细胞，用于临床疾病的治疗，并解决免疫排斥和潜在的致肿瘤的问题。 成体干细胞的横向分化的能力以及与胚胎干细胞的比较，成体干细胞能否替代胚胎干细胞？ 诱导成神经细胞 （1）RA诱导； （2）生长因子诱导：FGF2，FGF8； （3）共培养法：与骨髓基质细胞共培养； （4）基因转染：Nurrl，bHLH，Mash1等； （5）体内移植； 红色细胞：神经元 绿色细胞：胶质细胞 胚胎干细胞脑内移植后分化为神经前体细胞（A图中红色细胞）和卫星细胞（B图中红色细胞） 诱导成胰岛素分泌细胞 （1）5阶段诱导法： ES?类胚体?巢蛋白（nestin)分泌细胞?胰岛素分泌细胞 3-磷酸肌醇-激酶抑制剂为重要的诱导剂 （2）基因转染：胰岛β细胞分化相关基因Pax 1和Pax 4 诱导成心肌细胞 DMSO、BMP2、抗坏血酸、5-氮杂胞苷和 TGF-β等诱导 与心肌细胞共培养 诱导成生殖细胞 体外分化 ESC?原始生殖细胞 体内分化（注入睾丸） 诱导条件：体外培养的微环境，加入TGFβ、整合素等。 已可分化为单倍体生精细胞，注入卵细胞后，可发育至囊胚。 五、人胚胎干细胞研究的意义 人胚胎发育机制及影响因素的研究 用于药物机理和毒性试验的研究，减少人体和动物的实验和临床研究。 将胚胎干细胞分化为功能细胞、组织和器官，用于移植治疗。 六、ES细胞研究面临的问题 用于干细胞研究的胚胎来源困难 如何保持胚胎干细胞的全能性 干细胞在体外发育成完整的器官尚难以做到 分化细胞移植仍有可能发生免疫排斥 安全性问题 分化后的细胞是否有致瘤性？ 动物细胞携带的病毒感染人类 6. 法律和伦理问题 解决胚胎来源有限的途径： (1) 未成熟卵的体外成熟 （2）体细胞重编程(去分化) 重编程 成纤维细胞—————ES样细胞———嵌合体 Oct4 Sox2 c-Myc Klf4 （Nature 2007） 体细胞重编程存在的问题： 低成功率：约0.1%诱导成功 致瘤性：20%的子代发生肿瘤 避免免疫排斥的方法 （1）建立足够量的带有不同组织相容性抗原 的胚胎干细胞系 （2）Knock-out 胚胎干细胞的组织相容性抗原 （3）体细胞重编程 （4）治疗性克隆（受者的体细胞核移植） 治疗性克隆（therapeutic cloning ）： 去核卵细胞 + 受者体细胞核 ?克隆 ?囊胚 ?分离内细胞群 ?ES细胞建系?ES细胞的诱导分化?移植治疗 通过治疗性克隆获得的胚胎干细胞特点 具有与核提供者相同的遗传特征。 移植后可避免免疫排斥 六、胚胎干细胞研究的法律和伦理问题 争论的焦点: 1.胚胎的生命权 2.父母的知情权 2.治疗性克隆和生殖性克隆 国际上多数国家的政府和学术界支持胚胎干细胞的研究，包括治疗性克隆的研究。 不同国家、地区的人胚胎干细胞研究政策 允许或制定灵活的ES研究政策： 澳大利亚，比利时，巴西，加拿大，中国，捷克斯洛伐克，丹麦，爱沙尼亚，芬兰，法国，希腊，匈牙利，冰岛，印度，以色利，日本，拉脱维亚，荷兰，新西兰，俄国，新