l5-三章测序与合成.pptVIP

第三章 核酸分析与合成第一节 核酸序列分析 1975年，Sanger加减法 Maxam-Gilbert化学法 1978年， Sanger末端终止法， 1958 胰岛素顺序+1980 测序 一、加减法 1、原理 *0-系统:不等长度片段 *加法：T4 DNA Polymerase+1dNTP(3’?5’外切 5’ ? 3’聚合） *减法：DNA PolymeraseI +3dNTP 2、应用举例 0-系统的产生 加法系统与减法系统 5’标记后电泳、放射自显影：读序与模板的关系、加减系统存在的必要、0系统存在的必要 二、特异化学试剂裂解法 1、原理:化学修饰碱基-糖苷键和磷酸酯键不稳定而水解 2、特异化学试剂裂解 嘌呤-硫酸二甲酯 嘧啶-肼和呱啶 *裂解G和A的反应（GA） *强化A的裂解（AG） *裂解C和T的反应 *裂解C的反应 举例 三、末端终止法 DNA聚合酶I及 2’, 3’-双脱氧核苷酸（ddNTP） 1、原理（genetic-rec-seq） 2、单链的产生：M13 3、停止与压缩反应 停止-M13的二级结构，阻止延伸-提高温度 压缩-由于产物的二级结构，多条条带走到一起-改变变性胶条件 4、测序自动化