B外源性DNA残留量测定法(精选).docVIP

附录Ⅸ B外源性DNA残留量测定法 第一法 DNA探针杂交法 供试品中的外源性DNA经变性为单链后吸附于固相膜上，在一定温度下可与相匹配的单链DNA复性而重新结合成为双链DNA，称为杂交。将特异性单链DNA探针标记后，与吸附在固相膜上的供试品单链DNA杂交，并使用与标记物相应的显示系统显示杂交结果，与已知含量的阳性DNA对照比对后，可测定供试品中外源性DNA的含量。 试剂（1）DNA标记和检测试剂盒 （2）DNA杂交膜尼龙膜或硝酸纤维素膜。 （3）2%蛋白酶K溶液 称取蛋白酶K 0.20g，溶于灭菌水10ml中，分装后储藏于-20℃备用。 （4）3%牛血清白蛋白溶液 称取牛血清白蛋白0.30g，溶于灭菌水10ml中。 （5）1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液（pH8.0） 用盐酸调pH值至8.0。 （6）5.0mol/L氯化钠溶液 （7）0.5mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH8.0） 用10mol/L 氢氧化钠溶液调节pH至8.0。 （8）20%十二烷基硫酸钠 SDS 溶液 用盐酸调pH至7.2。 （9）蛋白酶缓冲液（pH8.0） 量取1mol/L Tris溶液1.0ml（pH8.0），5mol/L 氯化钠溶液2.0ml，0.5mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液 pH8.0）2.0ml，20%SDS溶液 2.5 ml， 加灭菌水至10m